使用自动细胞计数器的三个tip
使用自动细胞计数器的三个tip
市场上近几年涌现出不少自动细胞计数器。这种仪器利用光学显微镜技术，但带来了更高的准确性、重复性，并将这一单调的工作自动化。样品体积小也是这种细胞计数器的额外优势。许多仪器使用一次性的玻片，只需要10-20 ul样品。将玻片插入自动细胞计数器中，照相机捕获图像。随后内置的软件分析图像，显示细胞数量等信息。在此，专家介绍了使用自动细胞计数器的三个tip。准确对焦与其他光学显微镜一样，仪器的准确对焦对于计数很关键。在手动计数时，训练有素的大脑可轻松鉴定细胞。然而，自动细胞计数器内的照相机检测活细胞的亮中心和暗边缘，将其处理成黑白像素信息。如果细胞未准确对焦，那么亮中心将有明显的灰度，会被误认为是死细胞。大部分研究人员将会发现对焦并不难，只要显示在屏幕上的图像质量与传统的显微镜相似。确保你有一张清晰的图像，这很重要。另一点是要了解细胞计数器中照相机的分辨率。如果自动细胞计数器以低的帧速显示，如每秒小于15帧，那么显示的图像将不能实时响应聚焦旋钮的微调。控制玻片之间的差异大部分基于图像的自动细胞计数器都使用一次性的玻片，其上有明确的测量区域。这一测量区域被物镜的放大率和照相机的图像传感器大小所设定。这些细胞计数器通常测定0.4-0.5 ul样品，相当于血球计数器的4-5个大方格。与血球计数器不同，计数玻片通常只使用一次。因此，玻片之间的差异会显著影响细胞计数的结果。对于某一组实验，好使用同一批号的玻片，尽量避免这些差异。在更换批号时，也建议用标准的微珠来检验玻片。大部分细胞计数器制造商都提供已知浓度的标准微珠。使用相同的微珠样品来检验不同的玻片，将有助于发现差异。评估软件的分簇性能自动细胞计数器的核心是开展分析的软件，它相当于手动计数时的人脑。大部分的自动细胞计数器包含集成软件，能准确地计算单细胞群体的数量。然而，在谈到成簇细胞的计数时，细胞计数器就会存在明显差异。由于从培养细胞中获得的样品并不总是单细胞群体，因此，有时会有多个细胞团块，而自动细胞计数器的分簇（declustering）性能也仔细评估。评估分簇性能时可开展图1的检测。图1. 将hl-60细胞加热到70°c，处理20分钟，杀死细胞，获得死细胞样品。随后利用两款不同的自动细胞计数器进行样品的检测。在细胞计数之后，根据软件捕获的图像进行比较。红色圆圈：死细胞；蓝色圆圈：活细胞；黑色圆圈：排除的对象。自动细胞计数器正在取代单调乏味的手动计数方法。随着对一些基本原理的了解，自动细胞计数器将帮助你获得佳的结果。
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市场上近几年涌现出不少自动细胞计数器。这种仪器利用光学显微镜技术，但带来了更高的准确性、重复性，并将这一单调的工作自动化。样品体积小也是这种细胞计数器的额外优势。许多仪器使用一次性的玻片，只需要10-20 ul样品。将玻片插入自动细胞计数器中，照相机捕获图像。随后内置的软件分析图像，显示细胞数量等信息。在此，专家介绍了使用自动细胞计数器的三个tip。准确对焦与其他光学显微镜一样，仪器的准确对焦对于计数很关键。在手动计数时，训练有素的大脑可轻松鉴定细胞。然而，自动细胞计数器内的照相机检测活细胞的亮中心和暗边缘，将其处理成黑白像素信息。如果细胞未准确对焦，那么亮中心将有明显的灰度，会被误认为是死细胞。大部分研究人员将会发现对焦并不难，只要显示在屏幕上的图像质量与传统的显微镜相似。确保你有一张清晰的图像，这很重要。另一点是要了解细胞计数器中照相机的分辨率。如果自动细胞计数器以低的帧速显示，如每秒小于15帧，那么显示的图像将不能实时响应聚焦旋钮的微调。控制玻片之间的差异大部分基于图像的自动细胞计数器都使用一次性的玻片，其上有明确的测量区域。这一测量区域被物镜的放大率和照相机的图像传感器大小所设定。这些细胞计数器通常测定0.4-0.5 ul样品，相当于血球计数器的4-5个大方格。与血球计数器不同，计数玻片通常只使用一次。因此，玻片之间的差异会显著影响细胞计数的结果。对于某一组实验，好使用同一批号的玻片，尽量避免这些差异。在更换批号时，也建议用标准的微珠来检验玻片。大部分细胞计数器制造商都提供已知浓度的标准微珠。使用相同的微珠样品来检验不同的玻片，将有助于发现差异。评估软件的分簇性能自动细胞计数器的核心是开展分析的软件，它相当于手动计数时的人脑。大部分的自动细胞计数器包含集成软件，能准确地计算单细胞群体的数量。然而，在谈到成簇细胞的计数时，细胞计数器就会存在明显差异。由于从培养细胞中获得的样品并不总是单细胞群体，因此，有时会有多个细胞团块，而自动细胞计数器的分簇（declustering）性能也仔细评估。评估分簇性能时可开展图1的检测。图1. 将hl-60细胞加热到70°c，处理20分钟，杀死细胞，获得死细胞样品。随后利用两款不同的自动细胞计数器进行样品的检测。在细胞计数之后，根据软件捕获的图像进行比较。红色圆圈：死细胞；蓝色圆圈：活细胞；黑色圆圈：排除的对象。自动细胞计数器正在取代单调乏味的手动计数方法。随着对一些基本原理的了解，自动细胞计数器将帮助你获得佳的结果。
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