HPLC流动相，十个你不知道的“坑”！
流动相相当于液相的血液，在使用过程中会有各种需要注意的事项。其中有些“坑”千万要注意。
1.加入有机溶剂之后测量移动相酸碱度
如果你用有机添加剂测量ph值，得到的ph值会与添加有机溶剂之前的值不同。然而，重要的一点是要保持一致。如果你总是在加入有机溶剂之后测量ph值，那么务必保证在使用的方法中陈述你的步骤，这样的话其他人就会按照统一方式进行。这种方式并不保证*准确，但是至少可以保持方法的前后统一。这也许会比得到的ph值更加重要。
2.没有使用缓冲液
缓冲剂的作用就是用来控制ph值并阻止其发生变化。很多其他方法会改变流动相的ph值，会引起停留时间、峰形以及峰值响应的漂移。
3.甲酸、tfa等不是缓冲剂
4.没有在正常酸碱度范围内使用缓冲液
每个缓冲盐有2个ph单位范围宽度，在这个范围内可以提供稳定性比较好的ph值。窗口之外的缓冲盐不具备有效的抗ph值变化能力。要么在正确的范围内使用缓冲剂，要么选择一种缓冲剂可以涵盖你所需要的ph值。
5.向有机溶液中加缓冲液
将缓冲溶液与有机相混合，会极有可能引起缓冲液沉淀。在很多情况下，即使沉淀现象已经发生了，但仍很难被发现。记住，一定要将有机溶液加入到水相当中，这可以很好的降低缓冲液沉淀的几率。
6.从0%用泵混合浓度梯度
现在使用的泵可以有效的混合流动相并实现在线脱气，但并不是使用你的方法的任何人都会配有高质量的泵。将a和b混合到一个单独的溶液中，在100%线上运行。
比如说通过用50ml水混合制备有机950ml起始混合物。这样做的好处就是可以减少hplc之间的可变性，减少系统中产生气泡和沉淀的可能性。值得注意的是泵混合液的比例是95:5并不代表瓶体的预混合保留时间也为95:5。
7.不要使用正确的改性酸（碱）改变缓冲液
只能使用形成你使用的缓冲盐的酸或碱。比如磷酸钠缓冲液应仅用磷酸或氢氧化钠调节。
没有在方法中阐述有关缓冲液的全部信息，比如说在1000ml的水中加入5g磷酸钠。
缓冲剂的类型决定了能够缓冲的ph范围。所需的浓度决定了缓冲强度。5克或无水磷酸钠和5克一水合物磷酸一钠具有不同的缓冲强度。
8.还没先检查就开始添加有机溶剂
如果上一个方法中基线b中使用过的是缓冲液，而你的方法中，基线b使用的是有机溶液，好在你可以沉淀泵管和泵头中的缓冲剂。
9.支起瓶体清空后一滴
很有可能你没有足够的流动相完成整个操作，后样品会冒烟的。除了可能存在烧干泵系统和柱子的可能性之外，流动相也会蒸发的一干二净，瓶体顶部的流动相会发生变化。
10.利用超声脱气的流动相
重要的一点就是确保所有的缓冲盐已经溶解，但是这是一种效果差的脱气方式，并且它会很快让流动相升温，从而引起有机成分蒸发掉。为了省去之后不必要的麻烦，请用五分钟时间使用真空过滤你的流动相。
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2.没有使用缓冲液
缓冲剂的作用就是用来控制ph值并阻止其发生变化。很多其他方法会改变流动相的ph值，会引起停留时间、峰形以及峰值响应的漂移。
3.甲酸、tfa等不是缓冲剂
4.没有在正常酸碱度范围内使用缓冲液
每个缓冲盐有2个ph单位范围宽度，在这个范围内可以提供稳定性比较好的ph值。窗口之外的缓冲盐不具备有效的抗ph值变化能力。要么在正确的范围内使用缓冲剂，要么选择一种缓冲剂可以涵盖你所需要的ph值。
5.向有机溶液中加缓冲液
将缓冲溶液与有机相混合，会极有可能引起缓冲液沉淀。在很多情况下，即使沉淀现象已经发生了，但仍很难被发现。记住，一定要将有机溶液加入到水相当中，这可以很好的降低缓冲液沉淀的几率。
6.从0%用泵混合浓度梯度
现在使用的泵可以有效的混合流动相并实现在线脱气，但并不是使用你的方法的任何人都会配有高质量的泵。将a和b混合到一个单独的溶液中，在100%线上运行。
比如说通过用50ml水混合制备有机950ml起始混合物。这样做的好处就是可以减少hplc之间的可变性，减少系统中产生气泡和沉淀的可能性。值得注意的是泵混合液的比例是95:5并不代表瓶体的预混合保留时间也为95:5。
7.不要使用正确的改性酸（碱）改变缓冲液
只能使用形成你使用的缓冲盐的酸或碱。比如磷酸钠缓冲液应仅用磷酸或氢氧化钠调节。
没有在方法中阐述有关缓冲液的全部信息，比如说在1000ml的水中加入5g磷酸钠。
缓冲剂的类型决定了能够缓冲的ph范围。所需的浓度决定了缓冲强度。5克或无水磷酸钠和5克一水合物磷酸一钠具有不同的缓冲强度。
8.还没先检查就开始添加有机溶剂
如果上一个方法中基线b中使用过的是缓冲液，而你的方法中，基线b使用的是有机溶液，好在你可以沉淀泵管和泵头中的缓冲剂。
9.支起瓶体清空后一滴
很有可能你没有足够的流动相完成整个操作，后样品会冒烟的。除了可能存在烧干泵系统和柱子的可能性之外，流动相也会蒸发的一干二净，瓶体顶部的流动相会发生变化。
10.利用超声脱气的流动相
重要的一点就是确保所有的缓冲盐已经溶解，但是这是一种效果差的脱气方式，并且它会很快让流动相升温，从而引起有机成分蒸发掉。为了省去之后不必要的麻烦，请用五分钟时间使用真空过滤你的流动相。
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