液相色谱法检测蜜饯中甜蜜素实验方法
液相色谱法检测蜜饯中甜蜜素实验方法
（安徽皖仪科技股份有限公司）
一、实验目的
1. 检测蜜饯中的甜蜜素含量
2. 验证并重现文献中关于甜蜜素检测的方法，并有针对性的作出改进。
二、实验原理
在酸性的介质中，甜蜜素经次氯酸钠溶液衍生，正己烷反相萃取衍生物n,n-二氯环己胺，在314nm波长下有zui大吸收。
三、实验材料、试剂耗材及仪器设备
1. 实验材料
某品牌珍珠梅
2. 试剂耗材
2.1甜蜜素标准品乙腈（国药色谱纯）；超纯水（自制）；硫酸（优级纯）；次氯酸钠（有效氯含量超过5%）；正己烷（色谱纯）；针式过滤器（有机系和无机系）
2.2 工作液
2.2.1甜蜜素母液：称取1.0000g甜蜜素标准品，置于100ml容量瓶中加水定容，配制成10.00mg/ml的母液
2.2.2硫酸溶液（1：1）：取10ml超纯水于50ml烧杯中，另量取10ml浓硫酸小心加入到水中，边加边搅拌，待温度降至室温后使用。
2.2.3甜蜜素工作液：取甜蜜素母液，分别用水稀释成0.02、0.05、0.10、0.20、0.50、1.00mg/ml的标准工作溶液。
3. 仪器设备
安徽皖仪lc3100梯度系统液相色谱仪（可变波长紫外检测器）；超纯水机（安徽皖仪）；高速离心机；*；漩涡混合器
四、实验方法及步骤
1. 实验方法
1.1 制作系列梯度的甜蜜素标准工作曲线
1.2 样品衍生化，检测浓度
1.3 利用液相色谱法检测甜蜜素含量
色谱条件如下：
色谱柱： c18（2）,4.6*250mm，5um
流动相：乙腈：水=80：20 流速：1ml/min
进样量：20ul 柱温：40摄氏度
波长：314nm
2. 实验步骤：
2.1 标准工作曲线建立
2.1.2 分别吸取10ml甜蜜素标准工作液至50ml的带盖的玻璃瓶中
2.1.3 分别加入2ml硫酸溶液（1：1），5ml正己烷，1ml次氯酸钠溶液，旋紧盖子漩涡震荡1分钟
2.1.4 吸取上层的有机相转移到另一只玻璃瓶中，加入30ml超纯水，漩涡震荡1分钟
2.1.5 重复一次水洗过程，吸取上层有机相，0.45um滤膜过滤后进样检测
2.1.6 根据检测数据，以样品浓度为横坐标，检测器的响应值为纵坐标建立标准工作曲线
2.2 样品测定
2.2.1取10g的样品的果肉，用剪刀将其剪碎，置于100ml的烧杯中，加入50ml超纯水，浸泡2小时，在此期间每隔30分钟用玻璃棒搅拌一次。
2.2.2取上清液高速离心或用0.45um的滤膜过滤
2.2.3移取10ml离心或过滤后的溶液按照上述标准品的衍生方法处理，如果样品中的甜蜜素含量过高可稀释至合适的浓度，本实验根据实际情况将上清液稀释10倍，
2.2.4吸取衍生处理后的有机相层过滤，取20ul注入液相色谱仪检测
2.2.5根据实验数据采用外标法定量。
五、实验数据
1. 甜蜜素标准品谱图相关信息
1.1 标准品谱图
1.2 甜蜜素系列浓度标准品叠加图
1.3 标准工作曲线
2. 样品谱图信息
序号
文件名
峰面积
保留时间
峰高
半高峰宽
浓度
1
样2（稀释10倍）1
232726
7.334
16852
12.967
55.73546
2
样2（稀释10倍）2
224918
7.359
16817
12.558
53.79997
3
样2（稀释10倍）3
223725
7.431
16392
12.815
53.50424
4
样2（稀释10倍）4
228120
7.378
16521
12.965
54.5937
5
样2（稀释10倍）5
224275
7.371
16437
12.812
53.64058
6
样2（稀释10倍）7
224199
7.386
16722
12.589
53.62174
7
zui大值
232726
7.431
16852
12.967
55.735
8
zui小值
223725
7.334
16392
12.558
53.504
9
平均值
226327.2
7.377
16623.5
12.784
54.149
10
误差
3511.6
0.032
199.1
0.177
0.87
11
rsd
1.55%
0.43%
1.20%
1.39%
1.61%
六、实验结论及分析
1. 根据实验结果，此方法的线性工作曲线为：y=4003.4x+8095.6,线性相关系数为：r =0.9999
2. 根据样品的谱图信息，计算出珍珠梅的甜蜜素含量为：2.8g/kg，超出国家标准2.8倍（蜜饯国家标准为1.0g/kg）
七、实验讨论
1. 该实验未作检出限、低浓度线性范围，但作为食品添加剂的甜蜜素来说，该线性范围及检出限足够，如需检测更低浓度的甜蜜素含量，该实验还要进一步优化。
2. 该实验的优化过程中还缺少蜜饯中其他干扰物的影响，但据有的文献记载，在此色谱条件下，一些常用的食品添加剂并不影响甜蜜素的检测。
3. 样品在在采集过程中要注意将其尽量粉碎，以获得尽量充分的提取，否则测得的甜蜜素含量偏低
4. 色谱图中的主峰标注虽然是甜蜜素，但实际上是n,n-二氯环己胺。
5. 样品在衍生化的过程需要特别注意的一点。很多样品中的成分比较复杂，在水浸提液中含有很多糖、氨基酸、蛋白质和脂类等有机化合物，这些物质在此衍生体系下可能会凝结成胶状物质影响甜蜜素衍生的回收率。因此，在这种情况下，我们有两种解决方法：一是将原浸提也稀释足够的倍数，使能产生胶状物质尽量少，但缺点对仪器的检测限的要求提高，如果采用浓缩精提还要增加前处理的步骤和成本；二是采用在衍生的中间过程超声震荡的方法消除因胶状物质引起的气泡，排除大部分干扰，有利于下一步的萃取。
6. 需要说明的重要一点是，在进样之前一定要用有机滤膜过滤样品溶液，并且在色谱柱之前加上保护柱，虽然保护住的加入会引起峰的扩散。如果不未经过滤或为加保护柱，色谱柱极易被堵塞并且很难冲洗。
八、参考文献
1. 何良兴，林赛君，柯春晖，郭柏坤液相柱前衍生法测定蜜饯中的甜蜜素分析检测 204 2009，vol.30，no.04
2. 甜蜜素试験法日食安监発第0829010号
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一、实验目的
1. 检测蜜饯中的甜蜜素含量
2. 验证并重现文献中关于甜蜜素检测的方法，并有针对性的作出改进。
二、实验原理
在酸性的介质中，甜蜜素经次氯酸钠溶液衍生，正己烷反相萃取衍生物n,n-二氯环己胺，在314nm波长下有zui大吸收。
三、实验材料、试剂耗材及仪器设备
1. 实验材料
某品牌珍珠梅
2. 试剂耗材
2.1甜蜜素标准品乙腈（国药色谱纯）；超纯水（自制）；硫酸（优级纯）；次氯酸钠（有效氯含量超过5%）；正己烷（色谱纯）；针式过滤器（有机系和无机系）
2.2 工作液
2.2.1甜蜜素母液：称取1.0000g甜蜜素标准品，置于100ml容量瓶中加水定容，配制成10.00mg/ml的母液
2.2.2硫酸溶液（1：1）：取10ml超纯水于50ml烧杯中，另量取10ml浓硫酸小心加入到水中，边加边搅拌，待温度降至室温后使用。
2.2.3甜蜜素工作液：取甜蜜素母液，分别用水稀释成0.02、0.05、0.10、0.20、0.50、1.00mg/ml的标准工作溶液。
3. 仪器设备
安徽皖仪lc3100梯度系统液相色谱仪（可变波长紫外检测器）；超纯水机（安徽皖仪）；高速离心机；*；漩涡混合器
四、实验方法及步骤
1. 实验方法
1.1 制作系列梯度的甜蜜素标准工作曲线
1.2 样品衍生化，检测浓度
1.3 利用液相色谱法检测甜蜜素含量
色谱条件如下：
色谱柱： c18（2）,4.6*250mm，5um
流动相：乙腈：水=80：20 流速：1ml/min
进样量：20ul 柱温：40摄氏度
波长：314nm
2. 实验步骤：
2.1 标准工作曲线建立
2.1.2 分别吸取10ml甜蜜素标准工作液至50ml的带盖的玻璃瓶中
2.1.3 分别加入2ml硫酸溶液（1：1），5ml正己烷，1ml次氯酸钠溶液，旋紧盖子漩涡震荡1分钟
2.1.4 吸取上层的有机相转移到另一只玻璃瓶中，加入30ml超纯水，漩涡震荡1分钟
2.1.5 重复一次水洗过程，吸取上层有机相，0.45um滤膜过滤后进样检测
2.1.6 根据检测数据，以样品浓度为横坐标，检测器的响应值为纵坐标建立标准工作曲线
2.2 样品测定
2.2.1取10g的样品的果肉，用剪刀将其剪碎，置于100ml的烧杯中，加入50ml超纯水，浸泡2小时，在此期间每隔30分钟用玻璃棒搅拌一次。
2.2.2取上清液高速离心或用0.45um的滤膜过滤
2.2.3移取10ml离心或过滤后的溶液按照上述标准品的衍生方法处理，如果样品中的甜蜜素含量过高可稀释至合适的浓度，本实验根据实际情况将上清液稀释10倍，
2.2.4吸取衍生处理后的有机相层过滤，取20ul注入液相色谱仪检测
2.2.5根据实验数据采用外标法定量。
五、实验数据
1. 甜蜜素标准品谱图相关信息
1.1 标准品谱图
1.2 甜蜜素系列浓度标准品叠加图
1.3 标准工作曲线
2. 样品谱图信息
序号
文件名
峰面积
保留时间
峰高
半高峰宽
浓度
1
样2（稀释10倍）1
232726
7.334
16852
12.967
55.73546
2
样2（稀释10倍）2
224918
7.359
16817
12.558
53.79997
3
样2（稀释10倍）3
223725
7.431
16392
12.815
53.50424
4
样2（稀释10倍）4
228120
7.378
16521
12.965
54.5937
5
样2（稀释10倍）5
224275
7.371
16437
12.812
53.64058
6
样2（稀释10倍）7
224199
7.386
16722
12.589
53.62174
7
zui大值
232726
7.431
16852
12.967
55.735
8
zui小值
223725
7.334
16392
12.558
53.504
9
平均值
226327.2
7.377
16623.5
12.784
54.149
10
误差
3511.6
0.032
199.1
0.177
0.87
11
rsd
1.55%
0.43%
1.20%
1.39%
1.61%
六、实验结论及分析
1. 根据实验结果，此方法的线性工作曲线为：y=4003.4x+8095.6,线性相关系数为：r =0.9999
2. 根据样品的谱图信息，计算出珍珠梅的甜蜜素含量为：2.8g/kg，超出国家标准2.8倍（蜜饯国家标准为1.0g/kg）
七、实验讨论
1. 该实验未作检出限、低浓度线性范围，但作为食品添加剂的甜蜜素来说，该线性范围及检出限足够，如需检测更低浓度的甜蜜素含量，该实验还要进一步优化。
2. 该实验的优化过程中还缺少蜜饯中其他干扰物的影响，但据有的文献记载，在此色谱条件下，一些常用的食品添加剂并不影响甜蜜素的检测。
3. 样品在在采集过程中要注意将其尽量粉碎，以获得尽量充分的提取，否则测得的甜蜜素含量偏低
4. 色谱图中的主峰标注虽然是甜蜜素，但实际上是n,n-二氯环己胺。
5. 样品在衍生化的过程需要特别注意的一点。很多样品中的成分比较复杂，在水浸提液中含有很多糖、氨基酸、蛋白质和脂类等有机化合物，这些物质在此衍生体系下可能会凝结成胶状物质影响甜蜜素衍生的回收率。因此，在这种情况下，我们有两种解决方法：一是将原浸提也稀释足够的倍数，使能产生胶状物质尽量少，但缺点对仪器的检测限的要求提高，如果采用浓缩精提还要增加前处理的步骤和成本；二是采用在衍生的中间过程超声震荡的方法消除因胶状物质引起的气泡，排除大部分干扰，有利于下一步的萃取。
6. 需要说明的重要一点是，在进样之前一定要用有机滤膜过滤样品溶液，并且在色谱柱之前加上保护柱，虽然保护住的加入会引起峰的扩散。如果不未经过滤或为加保护柱，色谱柱极易被堵塞并且很难冲洗。
八、参考文献
1. 何良兴，林赛君，柯春晖，郭柏坤液相柱前衍生法测定蜜饯中的甜蜜素分析检测 204 2009，vol.30，no.04
2. 甜蜜素试験法日食安监発第0829010号
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板式压滤机的工作原理
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Y型过滤器的应用及安装
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PB-6过氧化氢生物指示剂使用说明书
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介绍一款电化学系统领域的强大工具
混凝土电通量测定仪常见故障及排除方法
10-50公斤鸡鸭肥料自动输送带称重计量包装机厂家
安防市场整体智能化升级 迈入智慧安防时代
一体化芬顿反应设备工作原理及主要特点
电力防护网.发电厂护栏.变电站设备围栏特高压换流站围墙设施
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贵金属激光切割机选用进口光纤激光器