血清的质量标准:
1. 内毒素标准为不高于5eu/ml
2. 总蛋白含量胎牛血清一般范围是30-40mg/ml,数值偏高偏低都会影响实验的正常进行
3. 血红蛋白标准为不高于20mg/dl
4. ph。国产血清、大多高于7.5,进口胎牛血清,大多低于7.5,根据ph的高低可用来初步鉴别血清的来源
5. 微生物。包括细菌、霉菌、支原体、噬菌体、各类病原性病毒等,大多都能清除。大肠杆菌噬菌体无法过滤,很难彻di清除,但对血清质量影响不大。病原性病毒,在国产血清中几乎90%以上都存在,是影响国产血清质量的重要原因之一
在实际筛选时,主要从血清外观和实验操作时细胞的生长状态进行。
一、从外观上:
1. 颜色:根据血红蛋白含量的不同,胎牛血清可表现出黄色或红色,这个指标的意义在于能体现出采血过程的严谨规范程度。胎牛血清或多或少总有点溶血,因为胎牛血清凝血功能差,红细胞容易破裂;
2. 澄清度:高质量的胎牛血清由于蛋白和脂类等物质含量低,表现为稀薄、清淡;
3. 血清沉淀:血清中的沉淀是由纤维蛋白的凝聚产生,对血清质量没有影响,沉淀的产生原因跟加工生产方式、是否反复冻融密切相关,在实验操作中可能会对细胞观察产生影响。
二、从性能上:
1. 细胞形态,在进行血清筛选时首先观察细胞的生长形态是否产生明显变化,以及观察贴壁细胞的贴壁情况,细胞在不同血清培养中可能会出现形态上的差异;
2. 倍增时间,一般情况下会选择倍增时间短的血清,值得注意的是血清的影响会传至5代,在进行测试时,最好培养五代后进行计倍增时间的计算;
3. 克隆形成率,测试时一般选50、100、200个细胞进行平板克隆测试,平均5d左右换一次液,两周后染色计数,对比克隆形成情况。
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