大鼠羟脯氨酸(Hyp)酶联免疫检测试剂盒说明
用 途：用于大鼠血清、血浆及相关液体样本中羟脯氨酸(hyp)测定。
工作原理
本试剂盒采用的是生物素双抗体夹心酶联免疫吸附法 (elisa) 测定样品中 大鼠羟脯氨酸(hyp)水平。向预先包被了大鼠羟脯氨酸(hyp)单克隆抗体的酶标孔 中加入大鼠羟脯氨酸(hyp)，温育；温育后，加入生物素标记的抗 hyp 抗体。再 与链霉亲和素-hrp 结合，形成免疫复合物，再经过温育和洗涤，去除未结合的 酶，然后加入底物 a、b，产生蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色 的深浅与样品中大鼠羟脯氨酸(hyp)的浓度呈正相关。
试剂盒组成
试剂盒组成
48 孔配置
96 孔配置
保存
说明书
1 份
1 份
封板膜
2 片 (48)
2 片 (96)
密封袋
1 个
1 个
酶标包被板
1 ×48
1 ×96
2-8℃保存
标准品 80μg/l
0.5ml×1 瓶
0.5ml×1 瓶
2-8℃保存
标准品稀释液
3ml×1 瓶
6ml×1 瓶
2-8℃保存
链霉亲和素-hrp
3 ml×1 瓶
6 ml×1 瓶
2-8℃保存
生物素标记的抗 hyp 抗体
0.5ml×1 瓶
1 ml×1 瓶
2-8℃保存
显色剂 a 液
3 ml×1 瓶
6 ml×1 瓶
2-8℃保存
显色剂 b 液
3 ml×1 瓶
6 ml×1 瓶
2-8℃保存
终止液
3ml×1 瓶
6ml×1 瓶
2-8℃保存
浓缩洗涤液
(20ml×20 倍) × 1 瓶
(20ml×30 倍) × 1 瓶
2-8℃保存
需要而未提供的试剂和器材
1． 37℃恒温箱。
2． 标准规格酶标仪。
3． 精密移液器及一次性吸头
4． 蒸馏水，
5． 一次性试管
6． 吸水纸
注意事项
1． 从 2-8℃取出的试剂盒，在开启试剂盒之前要室温平衡至少 30 分钟。酶标包 被板开封后如未用完，板条应装入密封袋中保存。
2． 各步加样均应使用加样器，并经常校对其准确性，以避免试验误差
3． 严格按照说明书的操作进行，试验结果判定必须以酶标仪读数为准.
4． 为避免交叉污染，要避免重复使用手中的吸头和封板膜。
5． 不用的其它试剂应包装好或盖好。不同批号的试剂不要混用。保质前使用。
6． 底物 b 对光敏感，避免长时间暴露于光下。
洗板方法
手工洗板方法：甩掉酶标板内的液体；在实验台上铺垫几层吸水纸，酶标板朝下 用力拍几次；将稀释后的洗涤液至少 0.35ml注入孔内，浸泡 1-2 分钟。根据需 要，重复此过程数次。
自动洗板：如果有自动洗板机，应在熟练使用后再用到正式实验过程中
标本要求
1．不能检测含nan3 的样品，因 nan3 抑制辣根过氧化物酶的 (hrp) 活性。
2．标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实 验。若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融。
操作程序
1. 标准品的稀释： (本试剂盒提供原倍标准品一支，用户可按照下列图表在小
试管中进行稀释。)
40μg/l
5 号标准品
120 μ l 的原倍标准品加入 120 μ l 标准品稀释液
20μg/l
4 号标准品
120 μ l 的 5 号标准品加入 120 μ l 标准品稀释液
10μg/l
3 号标准品
120 μ l 的 4 号标准品加入 120 μ l 标准品稀释液
5μg/l
2 号标准品
120 μ l 的 3 号标准品加入 120 μ l 标准品稀释液
2.5μg/l
1 号标准品
120 μ l 的 2 号标准品加入 120 μ l 标准品稀释液
2. 根据代测样品数量加上标准品的数量决定所需的板条数。每个标准品和空白 孔建议做复孔。每个样品根据自己的数量来定，能使用复孔的尽量做复孔。
3. 加样：1) 空白孔，空白对照孔不加样品，生物素标记的抗 hyp 抗体，链霉 亲和素-hrp，只加显色剂 a&b 和终止液，其余各步操作相同；2) 标准品孔： 加入标准品 50ul，链霉亲和素-hrp50ul(标准品中已事先整合好生物素抗体， 故不加)；3) 代测样品孔：加入样本 40ul，然后各加入抗 hyp 抗体 10ul、 链霉亲和素-hrp50ul，盖上封板膜，轻轻震荡混匀，37℃温育 60 分钟。
4. 配液：将 30 倍浓缩洗涤液用蒸馏水 30 倍稀释后备用。
5. 洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置 30 秒后 弃去，如此重复 5 次，拍干。
6. 显色：每孔先加入显色剂a50ul，再加入显色剂 b50 μ l，轻轻震荡混匀，37℃ 避光显色 15 分钟.
7. 终止：每孔加终止液 50 μ l，终止反应 (此时蓝色立转黄色)。
8. 测定：以空白空调零，450nm 波长依序测量各孔的吸光度 (od 值) 。 测定应 在加终止液后 10 分钟以内进行。
9. 根据标准品的浓度及对应的od 值计算出标准曲线的直线回归方程，再根据 样品的od 值在回归方程上计算出对应的样品浓度。也可以使用各种应用软 件来计算。
操作程序总结：
1.准备试剂，样品和标准品
2.加入准备好的样品和标准品，生物素标记的二抗和酶标试剂，37℃反应60分钟
3.洗板5次，加入显色液a、b，37℃显色15分钟
4.加入终止液
5.10分钟内读od值
6.计算
试剂盒性能：
1.样品线性回归与预期浓度相关系数 r 值为 0.92 以上。
2.批内与批间应分别小于9%和 15%
检测范围：
检测范围：0-40μg/l。
保存条件及有效期：
保存：2-8℃。
有效期：6 个月(2-8℃)。
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试剂盒组成
试剂盒组成
48 孔配置
96 孔配置
保存
说明书
1 份
1 份
封板膜
2 片 (48)
2 片 (96)
密封袋
1 个
1 个
酶标包被板
1 ×48
1 ×96
2-8℃保存
标准品 80μg/l
0.5ml×1 瓶
0.5ml×1 瓶
2-8℃保存
标准品稀释液
3ml×1 瓶
6ml×1 瓶
2-8℃保存
链霉亲和素-hrp
3 ml×1 瓶
6 ml×1 瓶
2-8℃保存
生物素标记的抗 hyp 抗体
0.5ml×1 瓶
1 ml×1 瓶
2-8℃保存
显色剂 a 液
3 ml×1 瓶
6 ml×1 瓶
2-8℃保存
显色剂 b 液
3 ml×1 瓶
6 ml×1 瓶
2-8℃保存
终止液
3ml×1 瓶
6ml×1 瓶
2-8℃保存
浓缩洗涤液
(20ml×20 倍) × 1 瓶
(20ml×30 倍) × 1 瓶
2-8℃保存
需要而未提供的试剂和器材
1． 37℃恒温箱。
2． 标准规格酶标仪。
3． 精密移液器及一次性吸头
4． 蒸馏水，
5． 一次性试管
6． 吸水纸
注意事项
1． 从 2-8℃取出的试剂盒，在开启试剂盒之前要室温平衡至少 30 分钟。酶标包 被板开封后如未用完，板条应装入密封袋中保存。
2． 各步加样均应使用加样器，并经常校对其准确性，以避免试验误差
3． 严格按照说明书的操作进行，试验结果判定必须以酶标仪读数为准.
4． 为避免交叉污染，要避免重复使用手中的吸头和封板膜。
5． 不用的其它试剂应包装好或盖好。不同批号的试剂不要混用。保质前使用。
6． 底物 b 对光敏感，避免长时间暴露于光下。
洗板方法
手工洗板方法：甩掉酶标板内的液体；在实验台上铺垫几层吸水纸，酶标板朝下 用力拍几次；将稀释后的洗涤液至少 0.35ml注入孔内，浸泡 1-2 分钟。根据需 要，重复此过程数次。
自动洗板：如果有自动洗板机，应在熟练使用后再用到正式实验过程中
标本要求
1．不能检测含nan3 的样品，因 nan3 抑制辣根过氧化物酶的 (hrp) 活性。
2．标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实 验。若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融。
操作程序
1. 标准品的稀释： (本试剂盒提供原倍标准品一支，用户可按照下列图表在小
试管中进行稀释。)
40μg/l
5 号标准品
120 μ l 的原倍标准品加入 120 μ l 标准品稀释液
20μg/l
4 号标准品
120 μ l 的 5 号标准品加入 120 μ l 标准品稀释液
10μg/l
3 号标准品
120 μ l 的 4 号标准品加入 120 μ l 标准品稀释液
5μg/l
2 号标准品
120 μ l 的 3 号标准品加入 120 μ l 标准品稀释液
2.5μg/l
1 号标准品
120 μ l 的 2 号标准品加入 120 μ l 标准品稀释液
2. 根据代测样品数量加上标准品的数量决定所需的板条数。每个标准品和空白 孔建议做复孔。每个样品根据自己的数量来定，能使用复孔的尽量做复孔。
3. 加样：1) 空白孔，空白对照孔不加样品，生物素标记的抗 hyp 抗体，链霉 亲和素-hrp，只加显色剂 a&b 和终止液，其余各步操作相同；2) 标准品孔： 加入标准品 50ul，链霉亲和素-hrp50ul(标准品中已事先整合好生物素抗体， 故不加)；3) 代测样品孔：加入样本 40ul，然后各加入抗 hyp 抗体 10ul、 链霉亲和素-hrp50ul，盖上封板膜，轻轻震荡混匀，37℃温育 60 分钟。
4. 配液：将 30 倍浓缩洗涤液用蒸馏水 30 倍稀释后备用。
5. 洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置 30 秒后 弃去，如此重复 5 次，拍干。
6. 显色：每孔先加入显色剂a50ul，再加入显色剂 b50 μ l，轻轻震荡混匀，37℃ 避光显色 15 分钟.
7. 终止：每孔加终止液 50 μ l，终止反应 (此时蓝色立转黄色)。
8. 测定：以空白空调零，450nm 波长依序测量各孔的吸光度 (od 值) 。 测定应 在加终止液后 10 分钟以内进行。
9. 根据标准品的浓度及对应的od 值计算出标准曲线的直线回归方程，再根据 样品的od 值在回归方程上计算出对应的样品浓度。也可以使用各种应用软 件来计算。
操作程序总结：
1.准备试剂，样品和标准品
2.加入准备好的样品和标准品，生物素标记的二抗和酶标试剂，37℃反应60分钟
3.洗板5次，加入显色液a、b，37℃显色15分钟
4.加入终止液
5.10分钟内读od值
6.计算
试剂盒性能：
1.样品线性回归与预期浓度相关系数 r 值为 0.92 以上。
2.批内与批间应分别小于9%和 15%
检测范围：
检测范围：0-40μg/l。
保存条件及有效期：
保存：2-8℃。
有效期：6 个月(2-8℃)。
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