ELISA试剂盒实验稀释血清的步骤

每一盒elisa试剂盒里面都有一份对应的说明书，而每一份说明书里都会有写样本和稀释液的稀释比例，为什么样本都需要稀释呢?今天上海佰利莱生物为您分析：为何elisa实验血清样本都需要稀释?elisa试剂盒实验稀释血清的步骤：先把蛋白稀释一定的倍数，比如说10倍、20倍稀释（这样可以大体确定一个参数），将抗原进行一系列稀释包被微量反应板，再用一定稀释度的阳性参考血清和阴性参考血清进行孵育后洗涤，再加酶结合物进行反应，经孵育洗涤后，加底物溶液显色，终止反应后分别测定o.d值，选择o.d值≥1.0的那个抗原稀释度为zui适包被浓度。一般总是要选择那个o.d值稍大于1.0，而不选择小于1.0的抗原浓度。阴性参考血清o.d值要求<0.1-0.2。也就是要求阳性参考血清和阴性参考血清的o.d值有明显差别。在elisa试剂盒实验血清为什么要稀释？有两个原因：1）竞争抑制比较明显，应稀释竞争物；2）以降低非特异性反应，使特异性的抗原抗体反应充分体现出来。血清稀释用普通的pbs即可，可加1％的bsa，能有效降低elisa本底，当然如果你嫌麻烦我觉得用生理盐水替代pbs关系也不大。不管你是用直接竞争还是间接竞争，血清的稀释倍数肯定要事先确定，但也不用yi点点，你做一个预试验即可，选择od在1.0左右的稀释倍数，即你的竞争elisa中阴性孔od在1.0，这样作出来的曲线比较敏感。
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