单克隆抗体的优点有哪些？单抗制备步骤详解
单克隆抗体是人工制备的杂交瘤细胞生产的，杂交瘤细胞是由一个经抗原激活后的b细胞与一个骨髓瘤细胞融合形成。单克隆抗体优点：纯度高，灵敏度高，特异性强，交叉反应少，制备的成本低。缺点：对技术有一定的要求，而且通过抗原的化学处理很容易丢失表位。
1．单克隆抗体的优点
(1)杂交瘤可以在体外“yongjiu”地存活并传代，只要不发生细胞株的基因突变，就可以不断地生产高特异性、高均一性的抗体。
(2)可以用相对不纯的抗原，获得大量高度特异的、均一的抗体。
(3)由于可能得到“无xian量”的均一性抗体，所以适用于以标记抗体为特点的免疫学分析方法，如irma和elisa等。
(4)由于单克隆抗体的高特异性和单一生物学功能，可用于体内的放射免疫显像和免疫导向治疗。
2．单克隆抗体的局限性
(1)单克隆抗体固有的亲和性和局限的生物活性限制了它的应用范围。由于单克隆抗体不能进行沉淀和凝集反应，所以很多检测方法不能用单克隆抗体完成。
(2)单克隆抗体的反应强度不如多克隆抗体。
(3)制备技术复杂，而且费时费工，所以单克隆抗体的价格也较高。
义翘神州提供单克隆抗体制备服务，单克隆抗体具有高度特异性，只识别一个单一的表位。单克隆抗体的制备包含了以下多个关键步骤。
1）动物免疫
杂交瘤技术的di一步是选择合适的抗原免疫动物（通常为小鼠）。佐剂是增强特异性免疫反应的辅助物质，如弗氏wan全佐剂或弗氏不wan全佐剂。将抗原连同佐剂进行皮下注射，在多个位点重复注射多次，促进抗原特异性b淋巴细胞的活化和增殖。
在免疫过程中，定期对动物血清进行抗体效价测定。当抗体的效价达到目标时，处死动物。无菌条件下切除脾脏，用机械或酶的方法破坏脾脏以释放细胞。通过密度梯度离心法从剩余细胞中分离脾脏的b淋巴细胞。
2）融合和筛选
b淋巴细胞与hgprt缺陷骨髓瘤细胞进行融合形成杂交瘤细胞。细胞融合的主要方法有聚乙二醇（peg）法和电融合方法。与peg融合法相比，电融合的效率更高，对细胞的损伤更小。义翘神州即采用电融合的方式开发了19000多株杂交瘤抗体。
细胞融合后，利用hat培养基筛选杂交瘤细胞，其机制是在hat培养基上仅有杂交瘤细胞能生长，骨髓瘤细胞因不能正常合成dna而无法存活，b细胞在体外条件下也只能存活7-10天。经hat培养基筛选得到的杂交瘤细胞为多个克隆的混合物，必须对其进行第二轮筛选，筛选出杂交瘤细胞单个阳性克隆。通常采用有限稀释法进行亚克隆筛选，将杂交瘤细胞悬液进行多倍稀释，接种至96孔板上，每孔细胞不超过1个。培养后，再利用elisa检测各孔上清液的抗体，挑选阳性单克隆。
3）抗体纯化
在单克隆抗体应用之前需要对其进行纯化。蛋白a亲和纯化用于纯化单克隆抗体。如果客户需要更高的纯度，可进行进一步纯化。
4）质量控制
纯化后，将进行一系列质量控制检测，以确保单克隆抗体的质量。在a280nm测定od值来评估抗体浓度。sds-page电泳测定单克隆抗体的纯度。elisa检测评估单克隆抗体效价。
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单克隆抗体制备cn.sinobiological com/resource/antibody-technical/monoclonal-antibody-production
单克隆抗体制备服务：cn.sinobiological com/services/monoclonal-antibody-production-services
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(2)可以用相对不纯的抗原，获得大量高度特异的、均一的抗体。
(3)由于可能得到“无xian量”的均一性抗体，所以适用于以标记抗体为特点的免疫学分析方法，如irma和elisa等。
(4)由于单克隆抗体的高特异性和单一生物学功能，可用于体内的放射免疫显像和免疫导向治疗。
2．单克隆抗体的局限性
(1)单克隆抗体固有的亲和性和局限的生物活性限制了它的应用范围。由于单克隆抗体不能进行沉淀和凝集反应，所以很多检测方法不能用单克隆抗体完成。
(2)单克隆抗体的反应强度不如多克隆抗体。
(3)制备技术复杂，而且费时费工，所以单克隆抗体的价格也较高。
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1）动物免疫
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在免疫过程中，定期对动物血清进行抗体效价测定。当抗体的效价达到目标时，处死动物。无菌条件下切除脾脏，用机械或酶的方法破坏脾脏以释放细胞。通过密度梯度离心法从剩余细胞中分离脾脏的b淋巴细胞。
2）融合和筛选
b淋巴细胞与hgprt缺陷骨髓瘤细胞进行融合形成杂交瘤细胞。细胞融合的主要方法有聚乙二醇（peg）法和电融合方法。与peg融合法相比，电融合的效率更高，对细胞的损伤更小。义翘神州即采用电融合的方式开发了19000多株杂交瘤抗体。
细胞融合后，利用hat培养基筛选杂交瘤细胞，其机制是在hat培养基上仅有杂交瘤细胞能生长，骨髓瘤细胞因不能正常合成dna而无法存活，b细胞在体外条件下也只能存活7-10天。经hat培养基筛选得到的杂交瘤细胞为多个克隆的混合物，必须对其进行第二轮筛选，筛选出杂交瘤细胞单个阳性克隆。通常采用有限稀释法进行亚克隆筛选，将杂交瘤细胞悬液进行多倍稀释，接种至96孔板上，每孔细胞不超过1个。培养后，再利用elisa检测各孔上清液的抗体，挑选阳性单克隆。
3）抗体纯化
在单克隆抗体应用之前需要对其进行纯化。蛋白a亲和纯化用于纯化单克隆抗体。如果客户需要更高的纯度，可进行进一步纯化。
4）质量控制
纯化后，将进行一系列质量控制检测，以确保单克隆抗体的质量。在a280nm测定od值来评估抗体浓度。sds-page电泳测定单克隆抗体的纯度。elisa检测评估单克隆抗体效价。
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