普氏立克次体(rp)核酸检测试剂盒(pcr-荧光探针法)准备试剂与收集血样:
双重核酸试剂盒(荧光pcr法) 1. 收集标本:血清、血浆(edta 、柠檬酸盐、肝素抗凝)、细胞培养上清液、组织匀浆等尽早检测, 2-8 ℃ 保存48 小时;更长时间须冷冻( -20 ℃或 -70 ℃ )保存,避免反复冻融。
2. 标准品液配制:使用前加入0.5ml 蒸馏水 混匀,配成 120 0ng/ml 的溶液 。 设标准 管 8 管,管加标本稀释液 900ul ,第二至第八管加入标本稀释液 500ul 。在管中加入 120 0ng/ml 的标准品溶液 100ul 混匀后用加样器吸出 500ul ,移至第二管 。如此反复作对倍稀释,从第七 管 中吸出 500ul 弃去。第八 管 为空白对照。
3. 10× 标本稀释液用蒸馏水作 1: 1 0 倍稀释( 示例: 1ml浓稀释液 +9ml 蒸馏水)。
4. 洗涤液:用重蒸水 1:20 稀释(示例:1ml 浓缩洗涤液加入 19ml 的重蒸水)
检测程序:
1. 加样:每孔各加入标准品或待测样品 100ul ,将反应板充分混匀后置 37 ℃ 120 分钟。
2. 洗板:用洗涤液将反应板充分洗涤 4-6 次,向滤纸上印干。
3. 每孔中加入抗体工作液10 0ul 。将反应板充分混匀后置 37 ℃ 6 0 分钟。
4. 洗板:同前。
5. 每孔加酶标抗体工作液100ul 。将反应板置 37 ℃ 3 0 分钟。
6. 洗板:同前。
7. 每孔加入底物工作液100ul ,置 37 ℃ 暗处反应15 分钟。
8. 每孔加入100ul 终止液混匀。
9. 30分钟内用酶标仪在 45 0 nm 处测 吸光值。
性能:
1. 准确性:标准品线性回归与预期浓度相关系数r值,大于等于0.9900。
2. 灵敏度:检测浓度小于0.1 u/ml。
3. 特异性:不与其它可溶性结构类似物交叉反应。
4. 重复性:板内、板间变异系数均小于15%。
5. 贮藏:2-8℃,避光防潮保存。
6. 有效期:6个月
黑人burkitt淋巴瘤细胞;raji
人b淋巴细胞瘤细胞;ramos
人b淋巴细胞瘤细胞;ramos(ra.1)
人脑瘤细胞;sf126
人脑瘤细胞;sf763
人脑瘤细胞;sf767
人皮肤黑色素瘤细胞;sk-mel-1
人肾上腺皮质癌细胞;sw-13
人结直肠癌细胞;t84
人急性单核细胞白血病细胞;thp-1
人神经胶质细胞瘤细胞;u251
人组织细胞淋巴瘤细胞;u937 [u-937]
人胃腺癌细胞;bgc-823
人低分化肺腺癌细胞;glc-82 [glc82]
人喉癌上皮细胞;hep-2
人纤维肉瘤细胞;ht-1080
人绒癌细胞;jeg-3
人耐vp16绒癌细胞株;jeg-3/vp16
白介素-2转染耐vp16绒癌细胞;jeg-3/vp16-il-2
tnfa转染耐vp16绒癌细胞;jeg-3-vp16-tnfa
人急性t淋巴细胞白血病细胞;jurkat, clone e6-1
人神经母细胞瘤细胞;be(2)-m17
人乳腺癌细胞;mda-mb-157
人成骨肉瘤细胞;mg-63
人小细胞肺癌细胞;nci-h446
人多发性骨髓瘤细胞;rpmi-8226 [rpmi8826]
人脑瘤细胞;sf17
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