液相色谱柱选择困难？看准这些让你事半功倍
很多时候，实验室的小伙伴们都是参照标准来进行实验，可标准上一句“以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂”就足够让小伙伴们选择困难症犯，更不用说是自己做方法开发的实验了。的确，色谱是一门实验学科，没有谁能在未做实验的情况下预测出哪一根色谱柱能完成分离任务，尤其是当标准没有明确*色谱柱品牌型号的时候，这也就导致很多小伙伴经常内心os：c18柱那么多，哪个才能分的z hao？
别急，虽然我们不能准确地预测实验结果，但把握基本的色谱柱性能参数还是可以做到的。下面就听小编细细道来。
01 载碳量
*，反相c18在当今色谱分离领域依旧承担着ji大比例的分离任务，就是因为其性质适合大多数化合物的色谱分离，那么在选择色谱柱的时候，就一定要注意色谱柱本身的适用性，尽可能选择普适性强，适用面广的色谱柱，而c18柱的“载碳量”这一参数，就是尤为重要的参数之一。
对于一根普适性强的c18色谱柱，载碳量参数是在10%~20%之间，尤以20%附近z佳（16%-22%），因为这样比例略高的载碳量，在保证了化合物能有效保留的前提下，活性位点数量减小，出现残留吸附的情况也会减小。另外，稍高于普通c18的键合密度也有助于色谱键合相选择性的提高。
02 硅胶纯度
除了特殊情况以外，越是适用性强的填料越要选择b型硅胶。b型硅胶的硅胶纯度＞99.999%，金属离子含量＜10 ppm，并且孔径和粒径分布更加均匀，这样得到的色谱峰展宽更小，峰形更加对称。
03 封尾
不同品牌色谱柱的封尾工艺和封尾试剂不一样，这也是导致都是c18，性质差异却较大的原因之一。除非标准特殊说明使用未封尾色谱柱，一般情况下，优先选择使用封尾的色谱柱（end-capped），尤其是双封尾色谱柱，进行实验。
04 比表面积
可能很多小伙伴都会有意无意地忽略掉色谱柱的比表面积这个参数，其实这也是影响色谱柱性能的一个很重要的参数。比表面积的大小，将影响到键合相覆盖率的高低，以及目标物与键合相发成相互作用的概率大小。比表面积的大小，还会影响梯度平衡时间的长短。那么，在选择普适性强的色谱柱的时候，尽可能选择比表面积在180m²/g~450m²/g的色谱柱，像常见的320m²/g，350m²/g，420m²/g，450m²/g，都是适用面比较广的。
05 孔径
孔径的选择取决于分子量的大小。一般来说，要求孔径是分子直径三倍以上，这样分子才能顺利进入孔中有所保留。以分子量2000为界，分子量＜2000，可以选择100å、120å、150å等孔径；分子量＞2000，如多肽，核酸等大分子的分离，可以选择300å，甚至孔径更大的色谱填料。
06 色谱柱规格
如果标准上有具体的色谱柱规格，那无需多言。但当我们自己在做方法开发的时候，无从得知什么规格合适，而柱长、内径、粒径的不同又会影响到柱效、分离度、保留时间等系统适用性值，选择的不合适还可能造成色谱柱压力过高或污染。因此，保险起见，小伙伴们一开始可以选择4.6×250mm，5μm的色谱填料，这样5μm粒径柱压不会很高，也便于冲洗维护；柱长够长，多组分样品也具有一定的分离效率；柱内径也不至于太小而造成超载。
07特殊基团
特殊基团一般是指为了使得色谱填料具有*的特性和不一样的选择性，从而在色谱柱的键合工艺或封尾工艺过程中，添加的特殊官能团试剂。这些试剂的加入固然有助于分离一些本不易分离的组分，但是，在进行常规实验，或方法建立初期，不建议选择添加特殊基团的色谱柱，否则色谱分离的重现性可能在后续的实验中成为潜在的问题。
怎么样，通过上述的介绍，小伙伴是不是现在对色谱柱的参数有了更全面的认识了呢，以后在选择色谱柱的时候也会更有方向感，不会再如“雾里看花”一般不知如何选择了吧。
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对于一根普适性强的c18色谱柱，载碳量参数是在10%~20%之间，尤以20%附近z佳（16%-22%），因为这样比例略高的载碳量，在保证了化合物能有效保留的前提下，活性位点数量减小，出现残留吸附的情况也会减小。另外，稍高于普通c18的键合密度也有助于色谱键合相选择性的提高。
02 硅胶纯度
除了特殊情况以外，越是适用性强的填料越要选择b型硅胶。b型硅胶的硅胶纯度＞99.999%，金属离子含量＜10 ppm，并且孔径和粒径分布更加均匀，这样得到的色谱峰展宽更小，峰形更加对称。
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04 比表面积
可能很多小伙伴都会有意无意地忽略掉色谱柱的比表面积这个参数，其实这也是影响色谱柱性能的一个很重要的参数。比表面积的大小，将影响到键合相覆盖率的高低，以及目标物与键合相发成相互作用的概率大小。比表面积的大小，还会影响梯度平衡时间的长短。那么，在选择普适性强的色谱柱的时候，尽可能选择比表面积在180m²/g~450m²/g的色谱柱，像常见的320m²/g，350m²/g，420m²/g，450m²/g，都是适用面比较广的。
05 孔径
孔径的选择取决于分子量的大小。一般来说，要求孔径是分子直径三倍以上，这样分子才能顺利进入孔中有所保留。以分子量2000为界，分子量＜2000，可以选择100å、120å、150å等孔径；分子量＞2000，如多肽，核酸等大分子的分离，可以选择300å，甚至孔径更大的色谱填料。
06 色谱柱规格
如果标准上有具体的色谱柱规格，那无需多言。但当我们自己在做方法开发的时候，无从得知什么规格合适，而柱长、内径、粒径的不同又会影响到柱效、分离度、保留时间等系统适用性值，选择的不合适还可能造成色谱柱压力过高或污染。因此，保险起见，小伙伴们一开始可以选择4.6×250mm，5μm的色谱填料，这样5μm粒径柱压不会很高，也便于冲洗维护；柱长够长，多组分样品也具有一定的分离效率；柱内径也不至于太小而造成超载。
07特殊基团
特殊基团一般是指为了使得色谱填料具有*的特性和不一样的选择性，从而在色谱柱的键合工艺或封尾工艺过程中，添加的特殊官能团试剂。这些试剂的加入固然有助于分离一些本不易分离的组分，但是，在进行常规实验，或方法建立初期，不建议选择添加特殊基团的色谱柱，否则色谱分离的重现性可能在后续的实验中成为潜在的问题。
怎么样，通过上述的介绍，小伙伴是不是现在对色谱柱的参数有了更全面的认识了呢，以后在选择色谱柱的时候也会更有方向感，不会再如“雾里看花”一般不知如何选择了吧。
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