蛋白质分离纯化程序步骤
()材料的预处理及细胞破碎
分离提纯某种蛋白质时，先要把蛋白质从组织或细胞中释放出来并保持原来的天然状态，不丧失活性。所以要采用适当的方法将组织和细胞破碎。常用的破碎组织细胞的方法有：
1. 机械破碎法
这种方法是利用机械力的剪切作用，使细胞破碎。常用设备有，速组织捣碎机、匀浆器、研钵等。
2. 渗透破碎法
这种方法是在低渗条件使细胞溶胀而破碎。
3. 反复冻融法
生物组织经冻结后，细胞内液结冰膨胀而使细胞胀破。这种方法简单方便，但要注意那些对温度变化敏感的蛋白质不宜采用此法。
4. 超声波法
使用超声波震荡器使细胞膜上所受张力不均而使细胞破碎。
5. 酶法
如用*破坏微生物细胞等。
() 蛋白质的抽提
通常选择适当的缓冲液溶剂把蛋白质提取出来。抽提所用缓冲液的ph、离子强度、组成成分等条件的选择应根据欲制备的蛋白质的性质而定。如膜蛋白的抽提，抽提缓冲液中般要加入表面活性剂(十烷基磺酸钠、tritonx-100等)，使膜结构破坏，利于蛋白质与膜分离。在抽提过程中，应注意温度，避免剧烈搅拌等，以防止蛋白质的变性。
(三)蛋白质粗制品的获得
选用适当的方法将所要的蛋白质与其它杂蛋白分离开来。比较方便的有效方法是根据蛋白质溶解度的差异进行的分离。常用的有下列几种方法：
1. 等电点沉淀法
不同蛋白质的等电点不同，可用等电点沉淀法使它们相互分离。
2. 盐析法
不同蛋白质盐析所需要的盐饱和度不同，所以可通过调节盐浓度将目的蛋白沉淀析出。被盐析沉淀下来的蛋白质仍保持其天然性质，并能再度溶解而不变性。
3. 有机溶剂沉淀法
中性有机溶剂如乙醇、丙酮，它们的介电常数比水低。能使大多数球状蛋白质在水溶液中的溶解度降低，进而从溶液中沉淀出来，因此可用来沉淀蛋白质。此外，有机溶剂会破坏蛋白质表面的水化层，促使蛋白质分子变得不稳定而析出。由于有机溶剂会使蛋白质变性，使用该法时，要注意在低温下操作，选择合适的有机溶剂浓度。
(四)样品的进步分离纯化
用等电点沉淀法、盐析法所得到的蛋白质般含有其他蛋白质杂质，须进步分离提纯才能得到有定纯度的样品。常用的纯化方法有：凝胶过滤层析、离子交换纤维素层析、亲和层析等等。有时还需要这几种方法联合使用才能得到较纯度的蛋白质样品。
上海金鹏分析仪器有限公司 / ： 400免费： 手机： ，，，，传真：地址：上海市真陈路1398弄15号 ：
血清不稳定原因及主要作用
1mm聚四氟乙烯板表面光滑度怎么样？
悬臂梁冲击强度的计算方法你了解吗？
ESH10W钟型浮子式疏水阀之产品技术参数与产品特点
多波长合束激光器能够同时产生和合束多种波长的激光
蛋白质分离纯化程序步骤
实验室移液从移液管到移液器的升级之旅
两项仪器发挥重要作用，天宫二号成果大揭秘
液体培养基其能有效地提高白芨种子萌发率
泰勒霍普森便携式粗糙度仪SURTRONIC S128信息
一体化污水处理设备对环境的好处是有哪些呢？
盐雾试验箱盐雾试验机东莞科迪仪器
锥形过滤器不锈钢锥形临时过滤器的特点适用范围和公制主要尺寸
木制品甲醛气候箱让你远离室内甲醛污染
10通道食品安全检测仪
数字锁定平衡阀特殊性
不锈钢二手反应釜的应用
东莞的圆导轨供应商有哪些？
MBBR污水处理设备的适用范围
桁架机械手的古往今来
分离提纯某种蛋白质时，先要把蛋白质从组织或细胞中释放出来并保持原来的天然状态，不丧失活性。所以要采用适当的方法将组织和细胞破碎。常用的破碎组织细胞的方法有：
1. 机械破碎法
这种方法是利用机械力的剪切作用，使细胞破碎。常用设备有，速组织捣碎机、匀浆器、研钵等。
2. 渗透破碎法
这种方法是在低渗条件使细胞溶胀而破碎。
3. 反复冻融法
生物组织经冻结后，细胞内液结冰膨胀而使细胞胀破。这种方法简单方便，但要注意那些对温度变化敏感的蛋白质不宜采用此法。
4. 超声波法
使用超声波震荡器使细胞膜上所受张力不均而使细胞破碎。
5. 酶法
如用*破坏微生物细胞等。
() 蛋白质的抽提
通常选择适当的缓冲液溶剂把蛋白质提取出来。抽提所用缓冲液的ph、离子强度、组成成分等条件的选择应根据欲制备的蛋白质的性质而定。如膜蛋白的抽提，抽提缓冲液中般要加入表面活性剂(十烷基磺酸钠、tritonx-100等)，使膜结构破坏，利于蛋白质与膜分离。在抽提过程中，应注意温度，避免剧烈搅拌等，以防止蛋白质的变性。
(三)蛋白质粗制品的获得
选用适当的方法将所要的蛋白质与其它杂蛋白分离开来。比较方便的有效方法是根据蛋白质溶解度的差异进行的分离。常用的有下列几种方法：
1. 等电点沉淀法
不同蛋白质的等电点不同，可用等电点沉淀法使它们相互分离。
2. 盐析法
不同蛋白质盐析所需要的盐饱和度不同，所以可通过调节盐浓度将目的蛋白沉淀析出。被盐析沉淀下来的蛋白质仍保持其天然性质，并能再度溶解而不变性。
3. 有机溶剂沉淀法
中性有机溶剂如乙醇、丙酮，它们的介电常数比水低。能使大多数球状蛋白质在水溶液中的溶解度降低，进而从溶液中沉淀出来，因此可用来沉淀蛋白质。此外，有机溶剂会破坏蛋白质表面的水化层，促使蛋白质分子变得不稳定而析出。由于有机溶剂会使蛋白质变性，使用该法时，要注意在低温下操作，选择合适的有机溶剂浓度。
(四)样品的进步分离纯化
用等电点沉淀法、盐析法所得到的蛋白质般含有其他蛋白质杂质，须进步分离提纯才能得到有定纯度的样品。常用的纯化方法有：凝胶过滤层析、离子交换纤维素层析、亲和层析等等。有时还需要这几种方法联合使用才能得到较纯度的蛋白质样品。
上海金鹏分析仪器有限公司 / ： 400免费： 手机： ，，，，传真：地址：上海市真陈路1398弄15号 ：
血清不稳定原因及主要作用
1mm聚四氟乙烯板表面光滑度怎么样？
悬臂梁冲击强度的计算方法你了解吗？
ESH10W钟型浮子式疏水阀之产品技术参数与产品特点
多波长合束激光器能够同时产生和合束多种波长的激光
蛋白质分离纯化程序步骤
实验室移液从移液管到移液器的升级之旅
两项仪器发挥重要作用，天宫二号成果大揭秘
液体培养基其能有效地提高白芨种子萌发率
泰勒霍普森便携式粗糙度仪SURTRONIC S128信息
一体化污水处理设备对环境的好处是有哪些呢？
盐雾试验箱盐雾试验机东莞科迪仪器
锥形过滤器不锈钢锥形临时过滤器的特点适用范围和公制主要尺寸
木制品甲醛气候箱让你远离室内甲醛污染
10通道食品安全检测仪
数字锁定平衡阀特殊性
不锈钢二手反应釜的应用
东莞的圆导轨供应商有哪些？
MBBR污水处理设备的适用范围
桁架机械手的古往今来