可用于胶原蛋白的纯化方法包括盐析法、透析法、离心法、电泳法和色谱法,其中盐析法、离心法和电泳法最为常用。由于单一方法难以wan全分离纯化胶原蛋白,实际操作都是通过复合法来达到分离纯化胶原蛋白的目的。
盐析法一般采用高浓度nacl;
离心法常选用制备型低温超速离心机;
电泳法多采用十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳法(sds-page),该法既可用于胶原蛋白的分离纯化,还可用来测定胶原蛋白分子的相对分子质量。
像有人用破碎、酶解、盐析三步法提纯苏尼特羊骨骼i型胶原蛋白。先去除骨头里的非胶原物质,然后往沉淀中10%的胃蛋白酶,在4℃的条件下消化24h,以14000r/min离心40min。弃沉淀往上清液中加nacl,使它终浓度达到0.9mol/l,静置过夜,再离心,最后的沉淀就是i型胶原蛋白。
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纯化胶原蛋白的方法
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