土壤纤维素酶(S-CL)测试盒的主要测定步骤

s-cl主要来源于土壤微生物,s-cl催化农作物秸秆产生的葡萄糖是主要的碳源营养物质。4-羟甲基-7-香豆-素(mub)在365nm波长处激发,能在470nm处检测到荧光,它与某些物质结合后荧光特性消失,通过酶的水解作用mub释放出来,通过检测荧光量来表征酶活性。试剂组成和配制:
试剂一:液体120ml×1瓶,4℃保存。
试剂二:粉剂×1瓶,4℃避光保存。用前加11ml蒸馏水充分溶解(可50℃震荡溶解)。
试剂三:液体10ml×1瓶,4℃保存。粗酶液提取:新鲜土样自然风干或37℃烘箱风干,过30~50目筛。
按照土壤质量(g):
试剂一ml)为 1:5~10的比例(建议称取约0.1g土壤,加入1ml试剂一),振荡混匀。
测定步骤:
测定管:在震荡条件下取100μl土壤悬液到ep管中,加入100μl试剂二,30℃震荡避光培养3h,从中吸取134μl到黑色不透光96孔板中,加入66μl试剂三后用多功能酶标仪进行检测,激发光波长365nm,测定波长470nm。
对照管:取100μl蒸馏水到ep管中,加入100μl试剂二,30℃震荡避光培养3h,从中吸取134μl到黑色不透光96孔板中,加入66μl试剂三后用多功能酶标仪进行检测,激发光波长365nm,测定波长 470nm。δa=a测定-a对照。

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