碱性磷酸酶同工酶检测试剂盒(抑制敏感法)的产品组成
碱性磷酸酶同工酶检测试剂盒(抑制敏感法)的产品组成
产品简介：
碱性磷酸酶(alkaline phosphatase，简称 alp 或 akp)为一类磷酸酯酶，广泛分布于哺乳动物组织内，其活性所需最适 ph 9.2~9.8，碱性磷酸酶同工酶有肝、骨、小肠、胎盘、
胆汁等同工酶。碱性磷酸酶同工酶检测试剂盒(抑制敏感法)采用磷酸苯二钠比色法，其检测原理是磷酸苯二钠在碱性条件下，可在碱性磷酸酶的作用下生成游离酚和磷酸，在碱性条件下酚与氨基安替比林结合，并经氧化生成红色醌式结构物，呈深浅不一的红色，产物红色越深说明碱性磷酸酶活性越高，反之则酶活性越低，通过比色法(分光光度计或酶标仪)测定 510nm 处吸光度，据此通过比色分析就可以计算出总的碱性磷酸酶活性水平；同时通过尿
素、苯丙氨酸抑制后测定残余alp 活性，以确定同工酶的性质，可用于检测细胞或组织的
裂解液或匀浆液、血浆、血清等样品中内源性的碱性磷酸酶同工酶活性；如果用分光光度计，100t 的检测试剂盒可检测 33 次左右；如果用酶标仪，100t 的检测试剂盒可检测 330 次左右。该试剂盒仅用于科研领域，不适用于临床诊断或其他用途。
自备材料：
1、离心管或 96 孔板、水浴锅或恒温箱、分光光度计或酶标仪
2、ddh2o 、pbs 或生理盐水
操作步骤(仅供参考)：
1、准备样品：
①细胞或组织样品：取恰当细胞或组织裂解液，如果有必要可用 pbs 或生理盐水进行适当匀浆，一般细胞数量在106以上，组织应在100mg 以上，3000~4000rpm 离心取上清，-20℃冻存，用于碱性磷酸酶同工酶的检测。
②血浆、血清和尿液样品：血浆、血清按照常规方法制备后可以直接用于该试剂盒的测定，尿液通常也可以直接用于测定，-20℃冻存，但为了消除样品本身颜色的干扰，需设置加了血浆或血清但不加底物的对照。
③高活性样品：如果样品中含有较高活性的碱性磷酸酶，可以使用原有的裂解液或 pbs等进行稀释，如鸡血清、血浆可稀释 5～10 倍后检测。
2、配制 alp 显色试剂：临用前将 alp 显色试剂 a 和 alp 显色试剂 b 按 1:2 比例混合即可，不宜长期保存。
3、配制标准品工作液：取出 phenol 标准(1mg/ml)恢复至室温后，取 0.1ml 溶解于 1.9ml ddh2o，即为 phenol 标准(0.05mg/ml)，按照下表稀释系列标准品溶液。
4、分光光度计测定(检测总 alp)：按照下表设置对照管、标准管、尿素测定管、苯丙测定
管、总alp 测定管，溶液应按照顺序依次加入，并注意避免产生气泡。如果样品中的碱性磷酸酶同工酶的活性过高，可以减少样品用量或适当稀释后再进行测定，样品的检测最好能设置平行管以0 号管(ddh2o)调零，比色杯光径 1cm，以分光光度计测定对照管、标准管、尿素测定管、苯丙测定管、总 alp 测定管 510nm 处吸光度(即a对照、a标准、a测定)。如无法检测 510nm，亦可检测 500～530nm 范围内吸光度，一般应 15min 内检测完毕。
5、酶标仪测定(检测总 alp)：按照下表设置对照孔、标准孔、尿素测定孔、苯丙测定孔、 总 alp 测定孔，溶液应按照顺序依次加入，并注意避免产生气泡。如果样品中的碱性磷酸酯酶活性过高，可以减少样品用量或适当稀释后再进行测定，样品的检测最好能设置平行孔。
计算：碱性磷酸酶金氏活性单位的定义：在37℃条件下，100ml 待测样品与显色底物(即
磷酸苯二钠)作用 15min，产生 1mg 酚为一个金氏单位(u/l)。
以系列phenol 标准(1～6 号管)对应的金氏单位为横坐标，以相应的a标准(1～6 号管)
为纵坐标，绘制标准曲线(亦可分别制作标准曲线)。以(a测定-a对照)之差值为实际的吸光度，
用该差值与标准曲线进行对比，求出总alp、 尿素抑制 alp、苯丙抑制 alp 活性单位。
尿素抑制alp 残余活性百分率=尿素抑制 alp 残余活性/总 alp 活性×100%
苯丙抑制alp 残余活性百分率=苯丙抑制 alp 残余活性/总 alp 活性×100%
注意事项：
1、 待测样品中不能含有磷酸酶抑制剂，同时需避免反复冻融。
2、 如果没有分光光度计，也可以使用酶标仪测定，但应注意 96 孔板最大检测体积，推荐采用分光光度计检测。
3、 所测样品的值高于标准曲线的上限，应稀释样品后重新测定。
4、 如果空白管/孔显红色，说明 alp 显色液不可用，应丢弃。
5、 加入显色基液时应迅速，并且及时混匀，否则显色不充分。
6、 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
有效期：6 个月有效。常温运输，4℃保存。
碱性磷酸酶同工酶检测试剂盒(抑制敏感法)的产品组成
关键词：分光光度计 酶标仪 水浴锅 恒温箱
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胆汁等同工酶。碱性磷酸酶同工酶检测试剂盒(抑制敏感法)采用磷酸苯二钠比色法，其检测原理是磷酸苯二钠在碱性条件下，可在碱性磷酸酶的作用下生成游离酚和磷酸，在碱性条件下酚与氨基安替比林结合，并经氧化生成红色醌式结构物，呈深浅不一的红色，产物红色越深说明碱性磷酸酶活性越高，反之则酶活性越低，通过比色法(分光光度计或酶标仪)测定 510nm 处吸光度，据此通过比色分析就可以计算出总的碱性磷酸酶活性水平；同时通过尿
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裂解液或匀浆液、血浆、血清等样品中内源性的碱性磷酸酶同工酶活性；如果用分光光度计，100t 的检测试剂盒可检测 33 次左右；如果用酶标仪，100t 的检测试剂盒可检测 330 次左右。该试剂盒仅用于科研领域，不适用于临床诊断或其他用途。
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1、离心管或 96 孔板、水浴锅或恒温箱、分光光度计或酶标仪
2、ddh2o 、pbs 或生理盐水
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1、准备样品：
①细胞或组织样品：取恰当细胞或组织裂解液，如果有必要可用 pbs 或生理盐水进行适当匀浆，一般细胞数量在106以上，组织应在100mg 以上，3000~4000rpm 离心取上清，-20℃冻存，用于碱性磷酸酶同工酶的检测。
②血浆、血清和尿液样品：血浆、血清按照常规方法制备后可以直接用于该试剂盒的测定，尿液通常也可以直接用于测定，-20℃冻存，但为了消除样品本身颜色的干扰，需设置加了血浆或血清但不加底物的对照。
③高活性样品：如果样品中含有较高活性的碱性磷酸酶，可以使用原有的裂解液或 pbs等进行稀释，如鸡血清、血浆可稀释 5～10 倍后检测。
2、配制 alp 显色试剂：临用前将 alp 显色试剂 a 和 alp 显色试剂 b 按 1:2 比例混合即可，不宜长期保存。
3、配制标准品工作液：取出 phenol 标准(1mg/ml)恢复至室温后，取 0.1ml 溶解于 1.9ml ddh2o，即为 phenol 标准(0.05mg/ml)，按照下表稀释系列标准品溶液。
4、分光光度计测定(检测总 alp)：按照下表设置对照管、标准管、尿素测定管、苯丙测定
管、总alp 测定管，溶液应按照顺序依次加入，并注意避免产生气泡。如果样品中的碱性磷酸酶同工酶的活性过高，可以减少样品用量或适当稀释后再进行测定，样品的检测最好能设置平行管以0 号管(ddh2o)调零，比色杯光径 1cm，以分光光度计测定对照管、标准管、尿素测定管、苯丙测定管、总 alp 测定管 510nm 处吸光度(即a对照、a标准、a测定)。如无法检测 510nm，亦可检测 500～530nm 范围内吸光度，一般应 15min 内检测完毕。
5、酶标仪测定(检测总 alp)：按照下表设置对照孔、标准孔、尿素测定孔、苯丙测定孔、 总 alp 测定孔，溶液应按照顺序依次加入，并注意避免产生气泡。如果样品中的碱性磷酸酯酶活性过高，可以减少样品用量或适当稀释后再进行测定，样品的检测最好能设置平行孔。
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为纵坐标，绘制标准曲线(亦可分别制作标准曲线)。以(a测定-a对照)之差值为实际的吸光度，
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2、 如果没有分光光度计，也可以使用酶标仪测定，但应注意 96 孔板最大检测体积，推荐采用分光光度计检测。
3、 所测样品的值高于标准曲线的上限，应稀释样品后重新测定。
4、 如果空白管/孔显红色，说明 alp 显色液不可用，应丢弃。
5、 加入显色基液时应迅速，并且及时混匀，否则显色不充分。
6、 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
有效期：6 个月有效。常温运输，4℃保存。
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关键词：分光光度计 酶标仪 水浴锅 恒温箱
室内LED显示屏在使用过程中应注意哪些
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