百萤课堂之DNA定量试剂盒的实验方案
高灵敏度荧光的dna定量试剂盒针对cytocite和qubit荧光分析仪进行了优化。dna定量是用于各种基因组分析的dna样品制备中非常重要的。 这种portelite dsdna定量试剂盒提供了一种使用手持式荧光分析仪使用helixyte green探针定量dsdna的快速方法。 它针对cytocite 和qubit 荧光计进行了优化。 portelite dsdna定量分析线性超过五个数量级。 该测定法对rna上的双链dna（dsdna）具有高度选择性，并且设计为对于25pg / ul至100ng / ul的初始样品浓度是准确的。 helixyte green在与dsdna结合后表现出大的荧光增强，并且比uv吸光度读数更敏感。
一．百萤dna定量试剂盒适用仪器
量子位荧光计
ex: 480nm
em: 520nm
规格:0.2ml pcr小瓶
cytocite荧光计
ex: 480nm
em: 520nm
规格:0.2ml pcr小瓶
二．百萤dna定量试剂盒实验方案
溶液制备
helixyte green 工作溶液制备：
为10个样品制备足够的工作溶液，将10μl helixyte green （组分a）加入2 ml dna分析缓冲液（组分b）中。 注意：用铝箔覆盖或将其置于黑暗中，以保护工作溶液免受光照。 注意：我们建议将此溶液用塑料容器而不是玻璃制备，因为染料可能会吸附到玻璃表面。 为获得佳效果，该溶液应在其制备后几小时内使用。
样品实验方案
样品体积是1~20μl（取决于dna样品的估计浓度）。推荐样品体积为10μl，dna浓度范围为0.5~10 ng /μl。如果使用其他样品量，请在浓度计算中调整稀释倍数。
1.基于10μl样品体积生成以下方案，dna浓度在0.5~10 ng /μl范围内。
1.1在每个cytocite 样品管（＃cct100）或等效的0.2 ml pcr管中加入190μl1xhelixyte green 工作溶液注意：使用薄壁聚丙烯，透明的0.2 ml pcr管，如＃cct100。
1.2将dna标准品或测试样品10μl加入每个试管中，然后涡旋混合2~3秒。
1.3让所有试管在室温下孵育2分钟。
1.4将样品插入cytocite 或quibit ，并用绿色荧光通道监测荧光。按照适用于cytocite 荧光分析仪的步骤进行操作。
2.标准校准曲线的制备
对于portelite 分析，您可以选择使用dna标准制作校准曲线。 以下是生成定制dna标准曲线的简要方案：
2.1用dna assay buffer进行稀释，得到10,8,6,4,2,1,0.5,0 ng /μldna标准稀释液。
2.2将190μlhelixytegreen 工作溶液加入0.2 ml pcr管中。
2.3每管加入10μl标准品或10μl样品。
2.4在室温下孵育反应2分钟。
2.5将样品插入cytocite 并用绿色荧光通道检测荧光。
数据分析
从空白标准孔获得的读数（rfu）用作阴性对照。 从其他标准的读数中减去该值，以获得基线校正值。 然后，绘制标准读数以获得标准曲线和方程。 该等式可用于计算浓度样本。
图1.使用portelite 荧光dna高灵敏度定量试剂盒生成的dna标准曲线。 使用fitc通道定量荧光强度，使用log-log best-fit计算回归模型。 检测限为10 pg /μl。
关键词：荧光分析仪 浓度计
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二．百萤dna定量试剂盒实验方案
溶液制备
helixyte green 工作溶液制备：
为10个样品制备足够的工作溶液，将10μl helixyte green （组分a）加入2 ml dna分析缓冲液（组分b）中。 注意：用铝箔覆盖或将其置于黑暗中，以保护工作溶液免受光照。 注意：我们建议将此溶液用塑料容器而不是玻璃制备，因为染料可能会吸附到玻璃表面。 为获得佳效果，该溶液应在其制备后几小时内使用。
样品实验方案
样品体积是1~20μl（取决于dna样品的估计浓度）。推荐样品体积为10μl，dna浓度范围为0.5~10 ng /μl。如果使用其他样品量，请在浓度计算中调整稀释倍数。
1.基于10μl样品体积生成以下方案，dna浓度在0.5~10 ng /μl范围内。
1.1在每个cytocite 样品管（＃cct100）或等效的0.2 ml pcr管中加入190μl1xhelixyte green 工作溶液注意：使用薄壁聚丙烯，透明的0.2 ml pcr管，如＃cct100。
1.2将dna标准品或测试样品10μl加入每个试管中，然后涡旋混合2~3秒。
1.3让所有试管在室温下孵育2分钟。
1.4将样品插入cytocite 或quibit ，并用绿色荧光通道监测荧光。按照适用于cytocite 荧光分析仪的步骤进行操作。
2.标准校准曲线的制备
对于portelite 分析，您可以选择使用dna标准制作校准曲线。 以下是生成定制dna标准曲线的简要方案：
2.1用dna assay buffer进行稀释，得到10,8,6,4,2,1,0.5,0 ng /μldna标准稀释液。
2.2将190μlhelixytegreen 工作溶液加入0.2 ml pcr管中。
2.3每管加入10μl标准品或10μl样品。
2.4在室温下孵育反应2分钟。
2.5将样品插入cytocite 并用绿色荧光通道检测荧光。
数据分析
从空白标准孔获得的读数（rfu）用作阴性对照。 从其他标准的读数中减去该值，以获得基线校正值。 然后，绘制标准读数以获得标准曲线和方程。 该等式可用于计算浓度样本。
图1.使用portelite 荧光dna高灵敏度定量试剂盒生成的dna标准曲线。 使用fitc通道定量荧光强度，使用log-log best-fit计算回归模型。 检测限为10 pg /μl。
关键词：荧光分析仪 浓度计
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