快速内切酶EcoRI/ C-BSM536解决方案
flycut™ 酶是一系列能够快速消化dna的工程限制性酶。所有flycut™酶在通用cutone中显示出优异的活性™ 和cutone™ 彩色缓冲液，能够在5~15分钟内消化dna。这使得任何限制性酶的组合都能在一个反应管中同时工作，并消除了连续消化的需要。flycut™ 酶已通过多项严格的质量控制，可用于消化质粒、基因组和病毒dna以及pcr产物。cutone™color buffer包括密度试剂以及红色和黄色跟踪染料，可以将反应混合物直接装载在凝胶上。cutone的红色染料™ 彩色缓冲液在1%琼脂糖凝胶中与2.5kb双链dna片段一起迁移，黄色染料在1%琼脂凝胶中与10bp双链dna碎片一起迁移。
艾美捷快速内切酶ecori：
cat #: c-bsm536
size: 600 rxns
storage: -20°c
快速内切酶ecori组分：
推荐反应条件
1x cutone“”缓冲器；在37°c下培养；有关反应设置，请参阅“快速dna消化方案”。
热灭活
在80°c下培养20分钟。
质量控制
功能测试
在含有1μgλdna和1μl flycut’ecori的cutone“缓冲液中，在37°c下孵育15分钟，20μl反应可通过琼脂糖凝胶电泳确定完-全消化。
长时间培养/星形活性测定
在含有1μgλdna和1μl flycut“ecori的cutone”缓冲液中，在37℃下孵育3小时，反应20μl，琼脂糖凝胶电泳检测到dna模式没有可检测的核酸酶降解。长期孵育可能导致星形活性。
结扎和清算
用flycut’“ecorl在37℃下消化10倍后，在22℃下可将>95%的dna片段与t4 dna连接物连接。琼脂糖凝胶电泳测定，在这些连接的片段中，>95%的片段可用flycut”ecori重切。
非特异性核酸内切酶活性
在含有1μg超螺旋质粒和1μl flycut’’ecori的cutone“缓冲液中，在37℃下孵育4小时，20μl反应可使琼脂糖凝胶电泳测定的刻痕或线性化形式的转化率<10%。
蓝/白筛选试验：
用1μl flycut消化含有laczα基因的合适载体™ecori。将消化产物连接并转化为大肠杆菌感受态细胞。在含有x-gal、iptg和适当抗生素的luria bertani培养板上，成功连接的β-半乳糖苷酶基因可以表达并产生蓝色菌落，而中断基因（即降解的dna末端）产生白色菌落。flycut™ 限制性内切酶必须产生少于1%的白色菌落。
在推荐的反应条件下，该酶可在5~15分钟内消化单位底物。酶的最适反应温度为37°c。
当底物dna被cpg甲基化酶甲基化时，这种限制性酶的切割可能被阻断或受损。
当底物dna被ecobi甲基化酶甲基化时，这种限制性酶的切割可能被阻断或受损。
该酶在80°c下保温20分钟即可热灭活，保温3小时不显示星形活性，但保温时间较长可能会产生星形活性。
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热灭活
在80°c下培养20分钟。
质量控制
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在含有1μgλdna和1μl flycut’ecori的cutone“缓冲液中，在37°c下孵育15分钟，20μl反应可通过琼脂糖凝胶电泳确定完-全消化。
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在含有1μgλdna和1μl flycut“ecori的cutone”缓冲液中，在37℃下孵育3小时，反应20μl，琼脂糖凝胶电泳检测到dna模式没有可检测的核酸酶降解。长期孵育可能导致星形活性。
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用flycut’“ecorl在37℃下消化10倍后，在22℃下可将>95%的dna片段与t4 dna连接物连接。琼脂糖凝胶电泳测定，在这些连接的片段中，>95%的片段可用flycut”ecori重切。
非特异性核酸内切酶活性
在含有1μg超螺旋质粒和1μl flycut’’ecori的cutone“缓冲液中，在37℃下孵育4小时，20μl反应可使琼脂糖凝胶电泳测定的刻痕或线性化形式的转化率<10%。
蓝/白筛选试验：
用1μl flycut消化含有laczα基因的合适载体™ecori。将消化产物连接并转化为大肠杆菌感受态细胞。在含有x-gal、iptg和适当抗生素的luria bertani培养板上，成功连接的β-半乳糖苷酶基因可以表达并产生蓝色菌落，而中断基因（即降解的dna末端）产生白色菌落。flycut™ 限制性内切酶必须产生少于1%的白色菌落。
在推荐的反应条件下，该酶可在5~15分钟内消化单位底物。酶的最适反应温度为37°c。
当底物dna被cpg甲基化酶甲基化时，这种限制性酶的切割可能被阻断或受损。
当底物dna被ecobi甲基化酶甲基化时，这种限制性酶的切割可能被阻断或受损。
该酶在80°c下保温20分钟即可热灭活，保温3小时不显示星形活性，但保温时间较长可能会产生星形活性。
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