sir-actin具有荧光性、细胞通透性和对f-actin的高度特异性。sir-actin染色内源性的f-actin不需要基因操作或过表达。它在远红光中的发射最大限度地降低了光毒性和样品的自身荧光。sir-actin兼容gfp和/或m-cherry荧光蛋白质。它可以用标准的cy5滤镜进行成像。sir-actin可用于活细胞和组织的宽视场、共聚焦、sim或sted成像。探针数量允许50 - 200染色实验。*(*基于以下条件:0.5 - 1ml染色液/ 0.5 - 1um探针浓度的染色实验。染色实验的数量可以通过减少体积或探针浓度来进一步增加)。
艾美捷sir-actin试剂盒#cy-sc001物理特性:
abs 652 nm
em 674 nm
ε652 nm 1.0·105 mol-1·cm-1
mw 1241.6 g/mol
mf c71h88n8o10si
sir-actin细胞成像
sir-actin的成像最好使用标准cy5设置进行。标记后,活细胞可以无需洗涤步骤即可立即成像。可选地,一个简单的洗涤步骤包括更换一次用不含探针的新鲜培养基标记溶液通常提高信噪比。如果时间流逝进行成像时,建议在整个实验过程中保持探针浓度等于或低于100nm获得恒定的信号,并避免探针干扰肌动蛋白动力学(减少细胞增殖)。如果清洗细胞
在成像之前,染色将持续几个小时。
探针浓度(nm) 建议标记时间(h)*
> 1000 0.5 - 1
500 3 - 4
200 4 - 6
< 100 6 - 12
sir-actin试剂盒文献参考:
1. fluorogenic probes for live-cell imaging of the cytoskeleton, g. lukinavičius et al., nature methods, 11, 731–733 (2014)
GFPuv荧光蛋白(应用于细菌内表达)
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