普通的基因扩增仪(pcr仪)只能够定性地分析是否存在目标片段。但是,某些需要定量的实验就必须用到实时荧光定量pcr仪了。实时荧光定量pcr仪比普通的pcr仪多了荧光信号采集系统和计算机分析处理系统,主要是用来定量分析和确定基因转录水平的。
实时荧光定量pcr仪主要由两部分组成,一个是pcr系统,一个是荧光检测系统。由于定量pcr必需借助样本和标准品之间的对比来实现定量的,对于定量pcr系统来说,重要的参数除了传统pcr的温控精确性、升降温速度等等,更重要的还在于样品孔之间的均一性,以避免微小的差别被指数级放大。至于荧光检测系统,多色多通道检测是当今的主流趋势,仪器的激发通道越多,仪器适用的荧光素种类越多,仪器适用范围就越宽;多通道指可同时检测一个样品中的多种荧光,仪器就可以同时检测单管内多模版或者内标+样品,通道越多,仪器适用范围越宽、性能就更强大。荧光检测系统主要包括激发光源和检测器。激发光源有卤钨灯光源、氩离子激光器、发光二极管led光源,前者可配多色滤光镜实现不同激发波长,而单色发光二极管led价格低、能耗少、寿命长,不过因为是单色,需要不同的led才能更好地实现不同激发波长。监测系统有超低温ccd成像系统和pmt光电倍增管,前者可以一次对多点成像,后者灵敏度高但一次只能扫描一个样品,需要通过逐个扫描实现多样品检测,对于大量样品来说需要较长的时间。定量pcr仪需要考虑的另外一个因素是软件设计,这一点目前较新型号的仪器都有不错的配套软件可以满足常规使用。
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