使用安捷伦净化产品对毛发中的羧基-THC进行 LC/MS/MS测定
本应用简报比较了两种 lc/ms/ms 型号，即 agilent6470a三重四极杆液质联用系统和 agilent6495c 三重四极杆液质联用系统。本研究总结了可用于复杂毛发基质的 样品前处理技术。同时还介绍了使用 agilentcaptiva emr-lipid 执行净化步骤时选择 用于验证的终方法，以达到毛发中羧基-thc 0.2 ng/g 的临界浓度。
通过毛发测试滥用药物已有 50 多年的历 史。与生物体液相比，毛发测试的一个优 势在于它可提供更大的药物检测窗口期。 许多药物在毛发中保存完好。一个示例是 在一具距今 900 年的木乃伊的毛发中检 出了可ka因。毛发测试的应用包括刑事调 查，核实吸毒史，鉴定药物辅助性侵犯， 在儿童监护权案件中证明du品的使用，假 释犯、药物治疗参与者或员工的戒断监 测，记录宫内暴露情况，以及确定某人是 否经常吸食大麻从而确定能否重新申领驾 照。图 1 显示了大麻素进入人体毛发的 可能途径。
由于毛发易于收集、很难掺假且具有较长 的检测期限，因此工作场所检测计划包 括毛发检测。许多/地区均发布了工 作场所毛发检测指南。指南确定大麻代谢 物/mg 毛发的初始测试临界浓度为 1 pg。 在巴西，该限值由毛发分析协会 (soht) 规定，每毫克毛发中 11-nor-9-羧 基-∆9 -四氢大ma酚 (thc-cooh) 的确认性 临界浓度为 0.0002 ng[2]。使用足够灵敏 的特定分析流程对毛发中的药物进行检测 和定量非常重要，这同时也是工作流程中 的瓶颈。这对毛发中的低浓度大麻素尤其 重要。免疫分析测试已得到广泛应用，但 在灵敏度、选择性和成本方面仍然存在 挑战。
色谱测定具有更高的特异性，可选择作为 毛发中大麻素的确定方法，提供良好的检 测限 (lod) 和定量限。灵敏的免疫分析和 气相色谱测定具有更高的特异性，是确 定毛发中大麻素的不错选择，可提供较 低的 lod 和定量限 (loq)。使用灵敏的 免疫分析、电子电离 (ei) 气相色谱/质谱 (gc/ms)、负化学电离 (ci) gc/ms， 以及气相色谱/串联质谱 (gc/ms/ms) 检 测毛发中大麻素的方法已有报道，其限值 仅为 soht 要求的 1/100–1/20，但需要 进行衍生化步骤[3–10]。
使用 lc/ms/ms 方法大的优势在于无 需衍生化，且该方法可用于筛查和确认 性测试。然而，与 gc/ms/ms 法相比， lc/ms/ms 法在大麻代谢物的检测和定 量方面存在不足，gc/ms/ms 在达到 检测*可提供丰度高的信号。这一 局限性终会因毛发基质的复杂性而在 lc/ms/ms 技术中产生，并观察到离子 抑制。仅在临界浓度或更低浓度下的代谢 物才会产生明显的上述效应。表 1 列出 了目标分析物的特征。
实验部分：
材料和试剂 使用的材料如下： • agilent captiva emr-lipid 过滤柱， 3ml，300 mg（部件号5190-1003）， 用于处理 40 mg 毛发，以及 1 ml， 40 mg（部件号 5190-1002）或 96 孔板（部件号 5190-1000）， 用于处理 25mg 毛发 • vac elut 20 真空萃取装置， 带 16 × 100 mm 试管收集架 （部件号12234103） • agilent infinitylab poroshell 120 phenyl-hexyl, 3.0 × 150 mm, 1.9µm （部件号 693675-312）， poroshell 120 phenyl-hexyl, 3×5mm, 1.9µm, uhplc 保护柱 （部件号823750-943） • agilent 1290 infinity ii 在线过滤器， 0.3µm（部件号 5067-6189） 使用的化学品如下： • 羧基-thc 和 羧基-thc-d3 标准品分 别购自 cerilliant 和 lgc • gc 级正己烷和乙酸乙酯 (etoac)，以 及 lc/ms 级甲醇 (meoh) 均购自 j.t. baker • acs 级氢氧化钠 (naoh) 和乙酸购自 merck/sigma • 超纯水购自 milli-q
标样和溶液：
• 氢氧化钠 1 mol/l（毛发消解溶 液）：称取 naoh (4 g) 置于烧杯中。 用 50ml 水溶解后，将溶液转移至 100 ml 容量瓶中。用少量水洗涤 烧杯 2–3次。将溶液超声处理 1分 钟，然后用水标定至容量瓶刻度。将 溶液保存在带塑料盖的瓶中 注意：当水加入氢氧化钠时会释放热量。 • 正己烷和 etoac (9:1 v/v)（毛发萃取 溶剂）：将 90 ml 己烷和 10ml 乙酸 乙酯混合均匀 • meoh/水 (80:20 v/v)（captiva emr-lipid 溶剂）：将 80 ml 甲醇和 20ml 超纯水混合均匀 • 内标 (is) ― 羧基-thc-d3：用 meoh 配制含 8 ng/ml 羧基-thc-d3 的 is 溶液，相当于基质中 8 ng/g • 校准曲线标样 ― 羧基-thc (ccs)： 用 meoh 配制浓度分别为 0.15、 0.2、0.4、0.8、1.6 和 3.2 ng/ml 的 六个校准标样 • 质量控制 (qc) 溶液（羧基-thc）：用 0.2ng/ml 的溶液对批次进行质量控 制。在开始分析之前，将 0.04 ng/ml 的溶液进样至 lc/ms/ms 中评估系 统适用性
样品前处理方法：依次用水、丙酮和二氯甲烷 (dcm) 对毛 发样品进行 1 分钟的涡旋清洗。干燥毛发 并将其剪成小块。随后，样品前处理方法 包括四个阶段：1) 毛发消解和预净化， 2)液液萃取 (lle)，3)captiva emr-lipid 净化，以及 4)lc/ms/ms 进样。
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由于毛发易于收集、很难掺假且具有较长 的检测期限，因此工作场所检测计划包 括毛发检测。许多/地区均发布了工 作场所毛发检测指南。指南确定大麻代谢 物/mg 毛发的初始测试临界浓度为 1 pg。 在巴西，该限值由毛发分析协会 (soht) 规定，每毫克毛发中 11-nor-9-羧 基-∆9 -四氢大ma酚 (thc-cooh) 的确认性 临界浓度为 0.0002 ng[2]。使用足够灵敏 的特定分析流程对毛发中的药物进行检测 和定量非常重要，这同时也是工作流程中 的瓶颈。这对毛发中的低浓度大麻素尤其 重要。免疫分析测试已得到广泛应用，但 在灵敏度、选择性和成本方面仍然存在 挑战。
色谱测定具有更高的特异性，可选择作为 毛发中大麻素的确定方法，提供良好的检 测限 (lod) 和定量限。灵敏的免疫分析和 气相色谱测定具有更高的特异性，是确 定毛发中大麻素的不错选择，可提供较 低的 lod 和定量限 (loq)。使用灵敏的 免疫分析、电子电离 (ei) 气相色谱/质谱 (gc/ms)、负化学电离 (ci) gc/ms， 以及气相色谱/串联质谱 (gc/ms/ms) 检 测毛发中大麻素的方法已有报道，其限值 仅为 soht 要求的 1/100–1/20，但需要 进行衍生化步骤[3–10]。
使用 lc/ms/ms 方法大的优势在于无 需衍生化，且该方法可用于筛查和确认 性测试。然而，与 gc/ms/ms 法相比， lc/ms/ms 法在大麻代谢物的检测和定 量方面存在不足，gc/ms/ms 在达到 检测*可提供丰度高的信号。这一 局限性终会因毛发基质的复杂性而在 lc/ms/ms 技术中产生，并观察到离子 抑制。仅在临界浓度或更低浓度下的代谢 物才会产生明显的上述效应。表 1 列出 了目标分析物的特征。
实验部分：
材料和试剂 使用的材料如下： • agilent captiva emr-lipid 过滤柱， 3ml，300 mg（部件号5190-1003）， 用于处理 40 mg 毛发，以及 1 ml， 40 mg（部件号 5190-1002）或 96 孔板（部件号 5190-1000）， 用于处理 25mg 毛发 • vac elut 20 真空萃取装置， 带 16 × 100 mm 试管收集架 （部件号12234103） • agilent infinitylab poroshell 120 phenyl-hexyl, 3.0 × 150 mm, 1.9µm （部件号 693675-312）， poroshell 120 phenyl-hexyl, 3×5mm, 1.9µm, uhplc 保护柱 （部件号823750-943） • agilent 1290 infinity ii 在线过滤器， 0.3µm（部件号 5067-6189） 使用的化学品如下： • 羧基-thc 和 羧基-thc-d3 标准品分 别购自 cerilliant 和 lgc • gc 级正己烷和乙酸乙酯 (etoac)，以 及 lc/ms 级甲醇 (meoh) 均购自 j.t. baker • acs 级氢氧化钠 (naoh) 和乙酸购自 merck/sigma • 超纯水购自 milli-q
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• 氢氧化钠 1 mol/l（毛发消解溶 液）：称取 naoh (4 g) 置于烧杯中。 用 50ml 水溶解后，将溶液转移至 100 ml 容量瓶中。用少量水洗涤 烧杯 2–3次。将溶液超声处理 1分 钟，然后用水标定至容量瓶刻度。将 溶液保存在带塑料盖的瓶中 注意：当水加入氢氧化钠时会释放热量。 • 正己烷和 etoac (9:1 v/v)（毛发萃取 溶剂）：将 90 ml 己烷和 10ml 乙酸 乙酯混合均匀 • meoh/水 (80:20 v/v)（captiva emr-lipid 溶剂）：将 80 ml 甲醇和 20ml 超纯水混合均匀 • 内标 (is) ― 羧基-thc-d3：用 meoh 配制含 8 ng/ml 羧基-thc-d3 的 is 溶液，相当于基质中 8 ng/g • 校准曲线标样 ― 羧基-thc (ccs)： 用 meoh 配制浓度分别为 0.15、 0.2、0.4、0.8、1.6 和 3.2 ng/ml 的 六个校准标样 • 质量控制 (qc) 溶液（羧基-thc）：用 0.2ng/ml 的溶液对批次进行质量控 制。在开始分析之前，将 0.04 ng/ml 的溶液进样至 lc/ms/ms 中评估系 统适用性
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