血清作为细胞培养重要耗材经常被使用,但是有时候血清不能一次性用完很多人会冻起来下次接着用,这样做会影响血清品质吗?
曾有研究发现,血清冻融三次,对肿瘤标志物的浓度影响不大,对于血浆,有报道在短时间内反复冻融三次,对总蛋白、白蛋白和免疫球蛋白含量影响不大,但作者推测对免疫球蛋白的活性有影响。重要的是一篇西北民族学院的文章,《反复冻融新生牛血清对促细胞生*应的影响》,作者针对sp2/0细胞,用mem培养基和三批新生牛血清进行培养。血清分别冻融4次至28次不等。然后绘制细胞生长曲线,根据公式t =t/a , a=log2
y/x计算细胞倍增时间(t 为细胞倍增时间, y 为细胞峰值前1 d 的细胞数, x 为接种细胞数, t 为细胞生长时间)。结果显示:选用的三批新生牛血清在反复冻融 28 次时, 血清促细胞生长的大增殖量变化不大,均高于1×106/ml, 但是血清促细胞生长的倍增时间在反复冻融 20次时延长, 即血清促细胞繁殖一代所需的时间在冻融次数达到 20 次时显著增加。笔者观察了一下该文章的结果列表,发现在冻融20次之前,细胞倍增时间延长2-3小时不等,20次时,则延长3-4小时。可见,影响还是比较显著的。该文章的局限是针对新生牛血清,而没有对胎牛血清进行测试。
国外有人对大鼠血清中的18种化学成分进行了检测,发现反复冻融3次对其中的14种成分没有显著影响,其他肌酸激酶,甘油三酯,葡萄糖,*,甚至包括氯离子有一些明显变化,但其浓度变化控制在10%以内。
总而言之,如果能避免牛血清的反复冻融,及时分装,那是理想的。如果在短时间内有几次反复冻融,也不用过于担心。但是,对于胎牛血清,还有一个问题,是反复冻融增高了血清产生沉淀或浑浊的风险。因为血清在融化时,冰块和蛋白融化的速度是不一样的,局部可能因蛋白浓度过高而产生沉淀。同时,如果血清内含有少量纤维蛋白原,那么在低温下也可以形成絮状沉淀,等到血清再融化时,沉淀就显现出来了。所以,血清的质量也非常重要。
因此对未使用完的血清反复冻融会影响到产品的品质,如果想了解更多血清相关知识,请咨询威正翔禹/缔一生物*专家。
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