胃蛋白酶（Pepsin）试剂盒说明书微板法
本试剂盒仅供科研使用
胃蛋白酶（pepsin）试剂盒说明书 (货号：ws0121w 微板法 48 样)
一、产品简介： 胃蛋白酶（pepsin）是一种消化性蛋白酶，由胃粘膜主细胞分泌，分解食物中蛋白 质成小肽段。一般用于神经性低酸症的鉴别，慢性胃炎、慢性胃扩张、慢性十二指肠炎等 症状时也会引起胃蛋白酶分泌的减少。 胃蛋白酶可催化血红蛋白水解生成含酚的氨基酸，含酚的氨基酸与福林酚反应后显蓝 色；其颜色的深浅与胃蛋白酶活性呈正比。
二、试剂盒组分与配制： 试剂名称 规格 保存条件 备注 提取液 液体 50ml×1 瓶 4℃保存 试剂一 液体 5ml×1 瓶 4℃保存 试剂二 粉体 mg×2 瓶 4℃保存 临用前甩几下使粉体落入底部，每瓶 再加 13ml 蒸馏水溶解备用。 试剂三 液体 15ml×1 瓶 4℃保存 试剂四 液体 3ml×1 瓶 4℃保存 标准品 粉体 mg×1 支 4℃保存 临用前加 2ml 提取液，再用蒸馏水稀 释 10 倍，即为 0.05mg/ml 酪氨酸。
三、所需的仪器和用品： 酶标仪、96 孔板、台式离心机、可调式移液器、天平、研钵、冰和蒸馏水。
四、胃蛋白酶活性测定： 1、样本制备： ① 组织样本： 取约 0.1g 组织，加入 1ml 提取液，进行冰浴匀浆。4℃×3500rpm 离心 5min，取上清， 置冰上待测。 【注】：若增加样本量，可按照组织质量（g）：提取液体积(ml)为 1：5~10 的比例 进行提取 ② 液体样本：液体用提取液按照 1:1 的比例混合稀释后，4℃×3500rpm，离心 5min， 取上清液检测。 2、上机检测： ① 酶标仪预热 30min 以上，调节波长至 680nm。 ② 所有试剂解冻至室温。 ③ 在 ep 管中依次加入： 试剂名称（μl） 测定管 对照管 样本 50 50 试剂一 50本试剂盒仅供科研使用 2 37℃孵育 5min 试剂二 250 250 37℃孵育 10min 试剂一 50 37℃孵育 5min 后，3000rpm 离心 5min，上清液待测。 ④ 显色反应，在 ep 管中： 试剂名称（μl） 测定管 对照管 标准管 （仅做一次） 空白管 （仅做一次） 上清液 30 30 标准品 30 提取液 30 试剂三 150 150 150 150 试剂四 30 30 30 30 37℃孵育 20min 后（若浑浊则室温 3000rpm 离心 5min），取 200μl 至 96 孔板中，于 680nm 处测定，读取吸光值 a。δa=a 测定-a 对照（每个样 本做一个自身对照）。 【注】1. 若δa 在零附近徘徊，可以延长反应时间 t（如 37℃孵育 10min 延长至 20min）或增加样本 量 v1（如增至 100μl，则试剂二相应减少），则改变后的反应时间 t 和样本量 v1 需代入计 算公式重新计算。 2. 若 a 测定值大于 1.5，可以减少样本量 v1（如减至 20μl，用提取液相应补充），则改变后的 样本量 v1 需代入计算公式重新计算。 五、结果计算： 1、按样本蛋白浓度计算： 酶活定义：37℃每毫克蛋白每分钟催化血红蛋白水解生成 1μg 酪氨酸为 1 个酶活单位(u)。 胃蛋白酶（u/mg prot）=[δa÷（a 标准-a 空白）×c 标准×v2]÷ (v1×cpr) ÷t =35×δa÷（a 标准-a 空白）÷cpr 2、按样本鲜重计算： 酶活定义：37℃每 g 组织每分钟催化血红蛋白水解生成 1μg 酪氨酸为 1 个酶活单位(u)。 胃蛋白酶（u/g 鲜重）=[δa÷（a 标准-a 空白）×c 标准×v2]÷(w×v1÷v) ÷t =35×δa÷（a 标准-a 空白）÷w 3、液体 lap 活力的计算: 酶活定义：37℃每毫升液体每分钟催化血红蛋白水解生成1μg酪氨酸为1个酶活单位(u)。 胃蛋白酶（u/ml）=[δa÷（a 标准-a 空白）×c 标准×v2]÷v1×2÷t =70×δa÷（a 标准-a 空白） v---加入提取液体积，1 ml； v1---加入样本体积，0.05ml； v2---第③歩反应总体积，0.35ml； t---反应时间，10min； c 标准---50μg/ml； w---样本质量，g； cpr---样本蛋白质浓度，mg/ml；建议使用本公司的 bca 蛋白含量检测试剂盒
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