蛋白质和多肽反相HPLC分析和纯化指南七
蛋白质氧化 - 蛋白质和多肽反相hplc分析和纯化指南
在氧化环境条件下，尽管蛋白质的几个氨基酸都可能受影响，但有可能被氧化的氨基酸是*；*可被氧化成*亚砜（图34）。
对*残基的氧化取决于其在蛋白质中的位置。埋藏在蛋白质内部的*不可能被氧化。接近表面且与溶剂接触的*侧链有可能被氧化。
氧化条件包括热、过渡金属的存在以及溶液中氧气的存在。
同脱酰胺作用一样，*的氧化可能导致生物活性的丧失或减弱，或者，在一些情况下对生物活性无影响。
这取决于*在蛋白质中的位置。但另一方面，*亚砜的存在说明蛋白质经受过氧化条件，因此*氧化可以指示蛋白质经受过胁迫条件。
图34. 在氧化环境条件下，*被氧化为*亚砜。
图35. 天然蛋白水解产生的重组人*viia的一氧化物和二氧化物的反相色谱法分离。
条件
色谱柱：c4 宽孔柱， 4.6 x 250 毫米
流动相：37~47% 乙腈-0.1% tfa体系，30分钟梯度洗脱。
样品：被过氧化氢部分氧化的重组人* viia。
通常会监测蛋白质治疗药物的氧化反应，因为它既可能影响生物活性，也可作为一种指示。
*的氧化反应会导致蛋白质疏水性下降，因此在反相hplc中，氧化蛋白会先于天然蛋白洗脱出来，如图35所示。
重组人*viia（rcf viia）被过氧化氢部分氧化后利用反相hplc对溶液进行分析。
氧化蛋白（两个*残基被氧化）先洗脱出来。
只有一个*被氧化的两种蛋白随后洗脱出来，后是天然蛋白。四种蛋白具有良好的分辨率。
尤其是只有一个*被氧化的两种蛋白间分辨率很高。这几种蛋白均有一个氧化*，仅区别于被氧化*的不同。
通常利用肽图监测*的氧化。
如图36所示，含氧化*的多肽比含天然*的多肽出峰时间早很多。
t2 metox 先于天然t2*水解片段洗脱出来；t11 metox先于天然 t11洗脱出来，使得鉴别和监测更容易。
图36. 部分氧化的人生长激素的肽图。
条件
色谱柱：c18宽孔柱，4.6 x 250 mm
流动相：0~40% 乙腈—0.1% tfa体系，梯度洗脱，120分钟。
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这取决于*在蛋白质中的位置。但另一方面，*亚砜的存在说明蛋白质经受过氧化条件，因此*氧化可以指示蛋白质经受过胁迫条件。
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氧化蛋白（两个*残基被氧化）先洗脱出来。
只有一个*被氧化的两种蛋白随后洗脱出来，后是天然蛋白。四种蛋白具有良好的分辨率。
尤其是只有一个*被氧化的两种蛋白间分辨率很高。这几种蛋白均有一个氧化*，仅区别于被氧化*的不同。
通常利用肽图监测*的氧化。
如图36所示，含氧化*的多肽比含天然*的多肽出峰时间早很多。
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条件
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