大鼠关节滑膜成纤维细胞 CIA-FLS细胞培养说明
细胞：cia-fls细胞
中文名称：大鼠关节滑膜成纤维细胞
生长特性：贴壁细胞
培养基：1640培养基 血清：10%fbs（gibco胎牛血清）
荧光株：cia-fls-rfp荧光标记细胞株 cia-fls-gfp荧光标记细胞株cia-fls-luc荧光标记细胞株
耐药株：cia-fls-ddp耐药株 cia-fls-ptx耐药株 cia-fls-adm耐药株
细胞检测服务：cia-fls细胞种属鉴定（细胞检测技术服务可直接咨询客服 ）
（网络信息主针对网络推广作用，仅供参考，细胞培养请咨询细胞库管理员，以细胞库管理员提供给您的信息为准，操作前，如果有不明白之处，先咨询细胞库管理员，避免不必要的损失；）
acp核酸检测（pcr荧光探针法）
实验目的：检测动物肺脏、淋巴结等组织中鹦鹉热衣原体(acp)dna，用于鹦鹉热衣原体(acp)感染的辅助诊断及流行病学调查。其检测结果仅供参考。
实验方法：选取一对acp特异性引物和一条特异性荧光探针，应用碱裂解法提取dna，在耐热dna聚合酶（taq酶）作用下，配以fq-buffer(内含mg2+、tris-hcl等)、四种核苷酸单体（dntps）等成分，通过pcr-荧光探针体外扩增法对鹦鹉热衣原体(acp)一段高保守区域进行扩增，从而达到快速实时定量检测之目的。
动物组织标本采集：取发病动物肺脏、淋巴结等组织1g左右，转至1.5ml离心管中。
标本预处理：
提取组织：取约100mg组织加1ml生理盐水，研磨成组织匀浆，取50ul匀浆液转至一洁净的1.5ml离心管中。
组织dna提取：向标本中加入50ul核酸提取液充分混匀，100℃烈解10min。13,000rpm 离心3min，取上清液4ul做pcr反应。
阴性质控品：取50μl阴性质控品加入50μl核酸提取液b，充分震荡。后100℃裂解10分钟，然后13,000rpm离心3分钟，取上清液4μl做pcr反应。
acp-阳性质控品：直接取4μl进行pcr扩增。或按照pcr扩增介绍方法进行定量分析。
贴壁细胞签收操作：
1. 收到细胞后请尽快更换为含 15% 血清的新鲜培养基，如因特殊情况需要继续使用原瓶培养基，请在原瓶培养基中额外添加 10% 的血清（原瓶培养基的继续使用时间最长不宜超过 72 小时）
2. 贴壁细胞收到后切忌立刻进行消化，将细胞换液后放置培养箱孵育 6-8 小时或过夜再做消化传代。
（网络信息主针对网络推广作用，仅供参考，细胞培养血清注意事项请咨询细胞库管理员，以细胞库管理员提供给您的信息为准，操作前，如果有不明白之处，先咨询细胞库管理员，避免不必要的损失；）
细胞常规培养传代流程（请严格遵照无菌操作）
1． 吸出原培养瓶中的培养基，pbs 缓冲液润洗细胞两次，加 2-3 ml 0.25% yi酶进行消化细胞（注意把握消化时间，通常控制在 1-2min）
2． 镜下观察消化情况，在细胞边缘缩小，贴壁松动时（不建议消化到细胞漂浮）去掉yi酶，加 6~8ml 培养基，轻轻吹打细胞层，尽量把细胞层吹落，吹散。
3． 取部分细胞悬液转移到新的培养皿/瓶中，添加适当的培养基，把细胞悬液打匀，于培养箱中培养。
4． 注意培养基 ph 值变化情况，定期换液（每周 2-3 次），待细胞密度达到 80%以后重复 1 项操作或者冻存。
关键词：培养箱
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细胞检测服务：cia-fls细胞种属鉴定（细胞检测技术服务可直接咨询客服 ）
（网络信息主针对网络推广作用，仅供参考，细胞培养请咨询细胞库管理员，以细胞库管理员提供给您的信息为准，操作前，如果有不明白之处，先咨询细胞库管理员，避免不必要的损失；）
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实验目的：检测动物肺脏、淋巴结等组织中鹦鹉热衣原体(acp)dna，用于鹦鹉热衣原体(acp)感染的辅助诊断及流行病学调查。其检测结果仅供参考。
实验方法：选取一对acp特异性引物和一条特异性荧光探针，应用碱裂解法提取dna，在耐热dna聚合酶（taq酶）作用下，配以fq-buffer(内含mg2+、tris-hcl等)、四种核苷酸单体（dntps）等成分，通过pcr-荧光探针体外扩增法对鹦鹉热衣原体(acp)一段高保守区域进行扩增，从而达到快速实时定量检测之目的。
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提取组织：取约100mg组织加1ml生理盐水，研磨成组织匀浆，取50ul匀浆液转至一洁净的1.5ml离心管中。
组织dna提取：向标本中加入50ul核酸提取液充分混匀，100℃烈解10min。13,000rpm 离心3min，取上清液4ul做pcr反应。
阴性质控品：取50μl阴性质控品加入50μl核酸提取液b，充分震荡。后100℃裂解10分钟，然后13,000rpm离心3分钟，取上清液4μl做pcr反应。
acp-阳性质控品：直接取4μl进行pcr扩增。或按照pcr扩增介绍方法进行定量分析。
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1. 收到细胞后请尽快更换为含 15% 血清的新鲜培养基，如因特殊情况需要继续使用原瓶培养基，请在原瓶培养基中额外添加 10% 的血清（原瓶培养基的继续使用时间最长不宜超过 72 小时）
2. 贴壁细胞收到后切忌立刻进行消化，将细胞换液后放置培养箱孵育 6-8 小时或过夜再做消化传代。
（网络信息主针对网络推广作用，仅供参考，细胞培养血清注意事项请咨询细胞库管理员，以细胞库管理员提供给您的信息为准，操作前，如果有不明白之处，先咨询细胞库管理员，避免不必要的损失；）
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1． 吸出原培养瓶中的培养基，pbs 缓冲液润洗细胞两次，加 2-3 ml 0.25% yi酶进行消化细胞（注意把握消化时间，通常控制在 1-2min）
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3． 取部分细胞悬液转移到新的培养皿/瓶中，添加适当的培养基，把细胞悬液打匀，于培养箱中培养。
4． 注意培养基 ph 值变化情况，定期换液（每周 2-3 次），待细胞密度达到 80%以后重复 1 项操作或者冻存。
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