单细胞分选的使用方法及用途

单细胞分选的使用方法及用途 单细胞分选用流式细胞仪将特定的细胞分选出来的技术,在分选前,细胞要被戴上特殊的符号,所用的符号细胞的探针是可以同待分选细胞外表特征性蛋白(抗原)结合的抗体,而这种抗体又可以同某种荧光染料结合。
当结合有荧光染料的探针与细胞群温育时,探针就会同具有特异外表抗原的细胞紧紧结合,因为抗体的结合,被结合的细胞带上了荧光符号,细胞被符号之后,除掉游离的抗体,并将细胞进行稀释。当稀释的细胞进入超声波振荡器时,极稀的细胞悬浮液形成很小的液滴,一个液滴中只含有一个细胞。液滴一旦形成并经过激光束时,激光束激发结合在细胞外表抗体分子成为一种标签。
当液滴逐一经过激光束时,受到两种检测器的检测:如果液滴中含有细胞就会激活干涉检测器,只有带有荧光符号细胞的液滴才会激活荧光检测器,当带有荧光符号的液滴经过激光束时,将两种检测器一起激活,引起液滴充电信号使鞘液带上负电荷。因为液滴带有负电荷,移动时就会向正极移动,进入到荧光符号细胞收集器中。单细胞分选请用50%的条件培养基,并将血清的比重提高到20%,条件培养基就是用过的培养基, 里面会含有细胞因子和其他分泌物, 这有助细胞存活。
如果是含有非荧光符号细胞的液滴进入激光束,只会被干涉检测器检测到,成果使充电信号将液滴的鞘液带上正电荷,从而在移动时偏向负极,被非荧光符号细胞收集器所收集。如果是不含有单细胞分选的液滴进入激光束,则不会被任何检测器所检测,因此不会产生充电信号,液滴的鞘液不会带上任何电 荷,所以在移动时不受任何影响直接进入非检测的收集器。
单细胞分选的原理其实跟分析相似,也是由鞘液带去给激光分析,根据所染的荧光来得出结果,而分选的不同就是细胞在经过激光后也会经过喷嘴,单个细胞会以单液滴的分式流出,再按分析结果由高压电板赋予相应的电荷,将其分选到不同的收集管中。单细胞分选有不同大小的喷嘴,喷嘴越小分选的速度就越快。所以挑选喷嘴要视乎细胞的大小,一般来说喷嘴需要比细胞大4-6倍。如果选的喷嘴太小,会令细胞容易受压 失去活性,也会影响分选的稳定性。

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