恒远生物|血清中出现沉淀物的原因及避免方法
血清：指血液凝固后，在血浆中除去纤维蛋白原分离出的淡黄色透明液体或指纤维蛋白原已被除去的血浆。主要作用是提供基本营养物质、提供激素和各种生长因子、提供结合蛋白、提供促接触和伸展因子使细胞贴壁免受机械损伤、对培养中的细胞的起到某些保护作用。
用于细胞培养的胎牛血清以及其它血清中可能存在的沉淀物有以下三种:
1.纤维蛋白：它是经常出现的较大的沉淀物，可以达到1-2mm，肉眼可观。因为血清都是在低温下进行收集和快速处理的，一些纤维蛋白原（可溶性的形成絮状纤维蛋白的前体）在处理过程中仍然处于溶解状态，当经过过滤分装后，就会在瓶中凝结出现纤维蛋白沉淀。
2.胆固醇、脂肪酸酯以及一些蛋白质。他们也是血清中出现沉淀物的常见原因。
3.磷酸钙：也是常见的一种沉淀物，通常会使血清出现浑浊的现象，并且在37℃培养的时候会增加。这种沉淀物在倒置显微镜下观察像小黑点，这些小黑点由于布朗运动看上去可以活动，因此经常被误认为是微生物污染。
影响：
1.血清中出现大量的沉淀物，血清将很难过滤。一般说来，在血清生产后已经经过100nm或者40nm的过滤处理，并经过严格的无菌检测，因此不推荐再次过滤用于细胞培养的血清。可以在大规模的细胞培养中将血清直接加到培养基中一起过滤。
3、污染，磷酸钙往往被误认为是微生物污染，研究者可能会在血清中观察到一些絮状的沉淀，就会去做无菌试验，将血清放在培养箱中培养几天，结果可能会观察到更多的絮状沉淀，因此就断定血清被污染了。我们建议不要直接将血清放在培养箱中培养观察是否有菌，而是将血清加到琼脂板上进行培养以观察是否有细菌生长。另外，也可以进行革兰氏染色，在油镜下观察，以确认是否有污染。
避免血清沉积发作的办法：
a）冻结血清时，请随时将之摇晃均匀，使温度及成分均一，削减沉积的发作。
b）血清分装冻存时，须规矩摇晃均匀（当心勿形成气泡），使温度与成分均一。
c）勿直接由-20℃直接至37℃冻结，因温度改变太大，简单形成蛋白质凝结而发作沉积。
d）勿将血清置于37℃太久，不然血清会变得污浊，一起血清中许多较不稳定的成份也会因此受到破坏，然后影响血清的质量。
e）血清的热灭活十分简单形成沉积物的增多，若非必要，能够无须做此过程。
f）若有必要做血清的热灭活，请遵守56℃，30分钟的准则，而且随时摇晃均匀，温度过高，时刻过久或摇晃不均匀，都会形成沉积物的增多。
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3.磷酸钙：也是常见的一种沉淀物，通常会使血清出现浑浊的现象，并且在37℃培养的时候会增加。这种沉淀物在倒置显微镜下观察像小黑点，这些小黑点由于布朗运动看上去可以活动，因此经常被误认为是微生物污染。
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3、污染，磷酸钙往往被误认为是微生物污染，研究者可能会在血清中观察到一些絮状的沉淀，就会去做无菌试验，将血清放在培养箱中培养几天，结果可能会观察到更多的絮状沉淀，因此就断定血清被污染了。我们建议不要直接将血清放在培养箱中培养观察是否有菌，而是将血清加到琼脂板上进行培养以观察是否有细菌生长。另外，也可以进行革兰氏染色，在油镜下观察，以确认是否有污染。
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a）冻结血清时，请随时将之摇晃均匀，使温度及成分均一，削减沉积的发作。
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c）勿直接由-20℃直接至37℃冻结，因温度改变太大，简单形成蛋白质凝结而发作沉积。
d）勿将血清置于37℃太久，不然血清会变得污浊，一起血清中许多较不稳定的成份也会因此受到破坏，然后影响血清的质量。
e）血清的热灭活十分简单形成沉积物的增多，若非必要，能够无须做此过程。
f）若有必要做血清的热灭活，请遵守56℃，30分钟的准则，而且随时摇晃均匀，温度过高，时刻过久或摇晃不均匀，都会形成沉积物的增多。
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