气相色谱内标法测定食品中甜蜜素含量
甜蜜素化学名称为环己基氨基磺酸钠，于1937年发现，1950年开始生产应用。它是由环己胺和***或氨基磺酸或三氧化硫反应后用naoh处理，再重结晶制得的一种白色结晶粉末，在高甜度甜味剂中，甜度是*低的，甜度为蔗糖的30～80倍。风味较自然，后苦不明显，热稳定性高，是不被人体吸收的低热能甜味剂。1969年曾因其致畸性的报道而被世界各国禁用，后来由于大量试验表明它并无致畸、致癌等作用，许多国家重又许可使用。我国于1987年开始应用甜蜜素，它是目前我国食品行业中应用*多的一种甜味剂。甜蜜素含量检测目前有气相色谱检测方法和液相色谱检测方法等。*经典的方法是gb/t5009.97-2003《食品中环己基氨基磺酸钠的测定》。但该方法是外标法，且用的是不锈钢填充柱，在没有自动进样器的条件下，要想定量准确，需要花很长时间。要准确地确定一个样品的甜蜜素含量，上机部分至少需要15-～20分钟(要求：进样水平非常高的人)，而用内标法只需5～10分钟(要求：一般操作者)。
本文采用在提取溶剂正己烷中加入两种内标物质(甲苯和乙酸正丁酯)对甜蜜素经过衍生后的产物进行定量。
1.试验部分
1.1原理
在硫酸介质中甜蜜素与*反应，生成环己醇亚硝酸酯，利用气相色谱法进行定性和定量。
1.2试剂(所用试剂不做说明皆为分析纯，水为蒸馏水)
1.2.1甜蜜素储备溶液：称取1.0000g甜蜜素(含量≥99.0%)，加水溶解并定容至100ml，此溶液浓度为10.00mg/ml，为储备液。置于4℃的冰箱中。本次试验溶液浓度为：10.320mg/ml
1.2.2甜蜜素标准使用溶液：取1.2.1储备液10ml，加水定容至100ml，为使用液，浓度为1.0000mg/ml。本次试验使用溶液浓度为：1.0320mg/ml
1.2.3100g/l硫酸溶液：称取50g浓硫酸，用水定容至500ml。
1.2.450g/l*溶液：称取25g*，用水定容至500ml。
1.2.5正己烷
1.2.6甲苯(内标)
1.2.7乙酸丁酯(内标)
1.2.8氯化钠
1.3仪器
1.3.1岛津gc-14c气相色谱仪(带fid检测器、毛细管进样口、n2000色谱工作站)
1.3.2db-5毛细管柱(30m×0.32mm×0.25μm)或其它类型毛细管柱，如db-1、db-1701
1.3.3离心机
1.3.410μl微量进样器
1.4仪器操作条件
1.4.1检测器：200℃
1.4.2汽化室：180℃
1.4.3柱温：70℃
1.4.4载气流速(压力)：100kpa
1.4.5氢气流速(压力)：50kpa
1.4.6空气流速(压力)：60kpa
1.5样品前处理
1.5.1内标溶液的配置：在正己烷中加入一定量的内标(乙酸丁酯和甲苯)1，加入的量以出色谱峰合适为宜。一般为500ml正己烷中加入内标100μl～200μl。本次实验乙酸丁酯的浓度为0.1344mg/ml(称量0.0672g乙酸丁酯于装有10ml左右正己烷的25ml容量瓶中，再将溶液转移至500ml容量瓶中并定容至刻度线，摇匀，备用。
1.5.2标准溶液前处理：吸取1.2.2标准溶液10ml于50ml比色管中，加10ml水，摇匀，置于冰浴中。加入5ml50g/l*溶液，5ml100g/l硫酸溶液，在冰浴中放置30min，并时常摇动，然后准确加入10ml1.5.1溶剂，5g氯化钠，摇匀后振摇80次。静置分层。吸出正己烷层于10ml带塞离心管中进行离心分层(如有机溶剂和水相很快就有分层或只要进样针能吸出提取的溶剂，就可以不需离心分离这一步骤)，吸取正己烷层1μl注入色谱仪进行分析。算出校正因子2。
1.5.3液体样品前处理：称取试样20.0g于50ml带塞比色管中，加10ml水。摇匀，置于冰浴中。处理过程同标准溶液前处理1.5.2。吸取正己烷层试样1μl注入色谱仪进行分析。
1.5.4固体样品前处理：称取已磨碎(剪碎)试样2.0～10.0g(根据样品中甜蜜素含量而定称取质量，使甜蜜素的量在1～10mg之间)于50ml带塞比色管中，加10ml水。一些样品不易溶解，如蜜饯类、山楂等，置于水浴锅中煮沸15min左右，冷却至60℃以下，置于冰浴中。处理过程同标准溶液前处理1.5.2。吸取正己烷层试样1μl注入色谱仪进行分析。
2结果与讨论
2.1.1分析方法的线性相关性的测定
分别吸取1.2.1标准溶液1ml、3ml、5ml、10ml、20ml于5个100ml容量瓶中，并定容至刻度，配成浓度分别为0.1032mg/ml、0.3096mg/ml、0.5160mg/ml、1.0320mg/ml、2.0640mg/ml的标准溶液。分别吸取以上标准溶液10ml于5支50ml比色管中，按1.5.2方法进行处理。每个标准点分别进样5次，每次进样1μl，以甜蜜素与内标物的质量比为横坐标，甜蜜素与内标物的峰面积比(取五次进样平均值)为纵坐标绘制标准曲线，得线性方程为y=0.43991x-0.00088，其线性相关系数为0.99999。(见表1)
由表1求出相对校正因子及其平均值，结果列于表2
2.1.2分析方法的准确度的测定
从市场上购买一种不含甜蜜素的饮料(样品名称：鲜橙多橙汁饮料生产单位：昆山统一企业食品有限公司净含量：2l生产日期：)，称取5份一定量的试样，用移液管分别加入1.2.2标准溶液1、3、5、10、15ml，按上述气相色谱操作条件测定甜蜜素回收率，结果都在99.7%～101.1%之间。准确度试验数据见表3。
2.1.3分析方法的精密度的测定
从市场上购买一种含有甜蜜素的饮料(样品名称：鲜橙多生产单位：康裕食品有限公司净含量：1.5l生产日期：)，从同一产品中称取五个试样。按1.5.2方法进行处理后，按上述气相色谱操作条件测定甜蜜素含量，得到标准偏差为0.0027，变异系数(rsd)为0.55%。精密度试验数据见表4。
3结论
综上所述，本方法简便、快速、准确，具有较高的准确度、精密度和回收率，线性关系好，是一种非常可行的分析方法。
注：1用甲苯和乙酸丁酯做内标都可以，可同时加入两种内标(选其中一种作为参照计算)，也可以只加其中一种。本次试验的数据是以乙酸丁酯为内标进行计算而获得的。
2甜蜜素用本方法衍生处理后，在毛细管柱上会出两个峰，一般是刚开始前面的大，后面的很小，但时间长了，后面的峰越来越大，相应的，前面的峰越来越小直至消失，但两个峰面积和是不变的(48小时之内)。计算校正因子时，用甜蜜素衍生产物的两个峰的面积和计算。检测样品时，两个峰可单独识别并采用同一个校正因子计算，结果相加，也可以使用工作站将峰面积相加，再计算含量。一批样品检测，样品和标准品使用同一浓度的内标溶剂，在计算校正因子时，可将内标物的量假定为1(任一定值皆可)，使用非常方便，不需知道加入的内标物的质量。否则，要称量内标物的质量，**至0.0001g，再定容至一定体积。算出内标物浓度，再进行校正因子的计算。
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下一篇：气相色谱仪在中药分析中的应用
朗科阀业
空气发生器在气相色谱仪中使用的时候需要注意什么问题？
怎么选择合适的水质监测浮标样式
通讯模块|3500/92-02-01-00
简单介绍一下单冲压片机的性能特点
气相色谱内标法测定食品中甜蜜素含量
X射线荧光光谱仪的广泛应用
HFS纵向撕裂开关使用与安装
小麦和面粉呕吐毒素快速定量检测仪
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中压鼓风机的安全操作
近红外光谱技术的应用范围
浅谈，电缆耐火燃烧试验机BS6387与GB/T19666的相同点和区别
如何使用手持式超声波流量计
真空测漏箱相对传统真空箱优势
全自动开口闪点测定仪的测试过程可全称自动化
优于传统工艺 实现高效率垃圾渗滤液处理
SITRANS P DS III
水浴氮吹仪的定期维护工作不能忘
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本文采用在提取溶剂正己烷中加入两种内标物质(甲苯和乙酸正丁酯)对甜蜜素经过衍生后的产物进行定量。
1.试验部分
1.1原理
在硫酸介质中甜蜜素与*反应，生成环己醇亚硝酸酯，利用气相色谱法进行定性和定量。
1.2试剂(所用试剂不做说明皆为分析纯，水为蒸馏水)
1.2.1甜蜜素储备溶液：称取1.0000g甜蜜素(含量≥99.0%)，加水溶解并定容至100ml，此溶液浓度为10.00mg/ml，为储备液。置于4℃的冰箱中。本次试验溶液浓度为：10.320mg/ml
1.2.2甜蜜素标准使用溶液：取1.2.1储备液10ml，加水定容至100ml，为使用液，浓度为1.0000mg/ml。本次试验使用溶液浓度为：1.0320mg/ml
1.2.3100g/l硫酸溶液：称取50g浓硫酸，用水定容至500ml。
1.2.450g/l*溶液：称取25g*，用水定容至500ml。
1.2.5正己烷
1.2.6甲苯(内标)
1.2.7乙酸丁酯(内标)
1.2.8氯化钠
1.3仪器
1.3.1岛津gc-14c气相色谱仪(带fid检测器、毛细管进样口、n2000色谱工作站)
1.3.2db-5毛细管柱(30m×0.32mm×0.25μm)或其它类型毛细管柱，如db-1、db-1701
1.3.3离心机
1.3.410μl微量进样器
1.4仪器操作条件
1.4.1检测器：200℃
1.4.2汽化室：180℃
1.4.3柱温：70℃
1.4.4载气流速(压力)：100kpa
1.4.5氢气流速(压力)：50kpa
1.4.6空气流速(压力)：60kpa
1.5样品前处理
1.5.1内标溶液的配置：在正己烷中加入一定量的内标(乙酸丁酯和甲苯)1，加入的量以出色谱峰合适为宜。一般为500ml正己烷中加入内标100μl～200μl。本次实验乙酸丁酯的浓度为0.1344mg/ml(称量0.0672g乙酸丁酯于装有10ml左右正己烷的25ml容量瓶中，再将溶液转移至500ml容量瓶中并定容至刻度线，摇匀，备用。
1.5.2标准溶液前处理：吸取1.2.2标准溶液10ml于50ml比色管中，加10ml水，摇匀，置于冰浴中。加入5ml50g/l*溶液，5ml100g/l硫酸溶液，在冰浴中放置30min，并时常摇动，然后准确加入10ml1.5.1溶剂，5g氯化钠，摇匀后振摇80次。静置分层。吸出正己烷层于10ml带塞离心管中进行离心分层(如有机溶剂和水相很快就有分层或只要进样针能吸出提取的溶剂，就可以不需离心分离这一步骤)，吸取正己烷层1μl注入色谱仪进行分析。算出校正因子2。
1.5.3液体样品前处理：称取试样20.0g于50ml带塞比色管中，加10ml水。摇匀，置于冰浴中。处理过程同标准溶液前处理1.5.2。吸取正己烷层试样1μl注入色谱仪进行分析。
1.5.4固体样品前处理：称取已磨碎(剪碎)试样2.0～10.0g(根据样品中甜蜜素含量而定称取质量，使甜蜜素的量在1～10mg之间)于50ml带塞比色管中，加10ml水。一些样品不易溶解，如蜜饯类、山楂等，置于水浴锅中煮沸15min左右，冷却至60℃以下，置于冰浴中。处理过程同标准溶液前处理1.5.2。吸取正己烷层试样1μl注入色谱仪进行分析。
2结果与讨论
2.1.1分析方法的线性相关性的测定
分别吸取1.2.1标准溶液1ml、3ml、5ml、10ml、20ml于5个100ml容量瓶中，并定容至刻度，配成浓度分别为0.1032mg/ml、0.3096mg/ml、0.5160mg/ml、1.0320mg/ml、2.0640mg/ml的标准溶液。分别吸取以上标准溶液10ml于5支50ml比色管中，按1.5.2方法进行处理。每个标准点分别进样5次，每次进样1μl，以甜蜜素与内标物的质量比为横坐标，甜蜜素与内标物的峰面积比(取五次进样平均值)为纵坐标绘制标准曲线，得线性方程为y=0.43991x-0.00088，其线性相关系数为0.99999。(见表1)
由表1求出相对校正因子及其平均值，结果列于表2
2.1.2分析方法的准确度的测定
从市场上购买一种不含甜蜜素的饮料(样品名称：鲜橙多橙汁饮料生产单位：昆山统一企业食品有限公司净含量：2l生产日期：)，称取5份一定量的试样，用移液管分别加入1.2.2标准溶液1、3、5、10、15ml，按上述气相色谱操作条件测定甜蜜素回收率，结果都在99.7%～101.1%之间。准确度试验数据见表3。
2.1.3分析方法的精密度的测定
从市场上购买一种含有甜蜜素的饮料(样品名称：鲜橙多生产单位：康裕食品有限公司净含量：1.5l生产日期：)，从同一产品中称取五个试样。按1.5.2方法进行处理后，按上述气相色谱操作条件测定甜蜜素含量，得到标准偏差为0.0027，变异系数(rsd)为0.55%。精密度试验数据见表4。
3结论
综上所述，本方法简便、快速、准确，具有较高的准确度、精密度和回收率，线性关系好，是一种非常可行的分析方法。
注：1用甲苯和乙酸丁酯做内标都可以，可同时加入两种内标(选其中一种作为参照计算)，也可以只加其中一种。本次试验的数据是以乙酸丁酯为内标进行计算而获得的。
2甜蜜素用本方法衍生处理后，在毛细管柱上会出两个峰，一般是刚开始前面的大，后面的很小，但时间长了，后面的峰越来越大，相应的，前面的峰越来越小直至消失，但两个峰面积和是不变的(48小时之内)。计算校正因子时，用甜蜜素衍生产物的两个峰的面积和计算。检测样品时，两个峰可单独识别并采用同一个校正因子计算，结果相加，也可以使用工作站将峰面积相加，再计算含量。一批样品检测，样品和标准品使用同一浓度的内标溶剂，在计算校正因子时，可将内标物的量假定为1(任一定值皆可)，使用非常方便，不需知道加入的内标物的质量。否则，要称量内标物的质量，**至0.0001g，再定容至一定体积。算出内标物浓度，再进行校正因子的计算。
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