影响冻存细胞活性的因素

做试验前要先学会冻存,以备自己在后面的试验中能坚持同一来源、稳定牢靠的细胞,且可减少污染或其它不利影响。你们细胞是怎样冻存的?求解!!!我的是4度冰箱放半小时,-20度冰箱半小时,然后转移到-80度冰箱!但是放在-80度冰箱1个月后,细胞复苏就感觉状态不太好了!!
影响冻存细胞活性的因素
1,细胞冻存保护剂:常用的有二甲基亚砜(dmso)和甘油,常用的浓度为5%-10%(90%小牛血清)。dmso对二倍体细胞的毒性较甘油小。
2,细胞悬液的冻住速度:慢冻时冰冻在细胞外形成,因此不致危害细胞。多数细胞以每分钟下降1℃的速度,降至-20℃冻住。均可取得满足效果。
3,保存温度:液氮罐,可到达-196℃,此刻所有的物理化学活动均降至zui低限度,以确保细胞长时间保存。
4,复苏:急速消融复苏可防止危害细胞。冻住细胞从液氮中取出后,应立即放入37℃~43℃的水浴中,30秒至一分钟内消融。

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