免疫共沉淀Co-IP实验步骤
co-ip（免疫共沉淀，co-inmunoprecipitation）是经典的利用抗体从样品中捕获靶蛋白及其互作蛋白、复合体的一项技术，能够特异性富集所研究的目的蛋白。
免疫共沉淀co-ip实验步骤
细胞转染
1.铺细胞，转染细胞。本次转染的两个蛋白分别带有flag和ha标签。
裂解细胞
2.去除培养基，pbs吹下细胞，离心去上清。将细胞沉淀转移到1.5mlep管中，pbs洗，离心去上清，加1ml裂解液。
3.冰上孵育40min，每10min震荡一次。
4.超声破碎细胞结构和打断染色质。冰上操作。
这个功率和时间要你自己摸索，不同细胞不同机器都会有差别，一般的国产机器对10^7细胞用20%功率超声4分钟左右即可比较充分（超声2秒，停2秒）。直到溶液相对比较清澈，没有丝状dna。
5. 4度，12000 rpm/min离心10mins。
6.转移上清(上清体积会有所增加，可能是因为细胞溶解了)到新的预冷的试管中。取50ul上清作为input。
7.将剩余样品分为两份,其中一份加入flag(mouse)抗体1ul（转染的蛋白带有flag标签），一份加入相应宿主的普通igg(mouse),4℃轻摇过夜，使抗体和目标蛋白充分结合。
抗体与beads的结合
8.将beads吸出至新管（每个107样品准备40ul beads悬液，约含20ul protein a/g beads，细胞较少时可适当减少，最少10ul悬液否则后续操作会很困难）用2倍体积(pbs+0.1%triton-100)洗涤3次，去上清。3000rpm离心1min基本可以充分沉淀，转速时间可调。
9.用等体积的buffer重悬beads。
10.在每个样品中加入20ul beads悬液，4℃轻摇2小时，使抗体和beads充分结合。
样品的收集和洗涤
11.将ip过后的样品离心3000rpm 1min。
12.将上清转移至新管 标记为flow through。
13.加入500ul (pbs+0.1%triton-100)洗涤beads4℃轻摇5min3000rpm 1min弃上清。
14.洗涤三次，最后一次尽量去除上清。
样品的洗脱
15.用30-100ul裂解液重悬beads，具体体积根据sds-page需求自定。
16.将样品和input中加入合适体积的loading buffer混匀，必要时可以将flow through进行制样检测。
17.95℃-100℃热变性10-15min，冷却后冻存备用。
18.sds-page和wb检测。ip用的是flag抗体，检测ha。
关于免疫共沉淀co-ip实验步骤，你还有什么疑问吗？
成套配电箱的安装注意事项
二次元三坐标测量机
分享气动隔膜泵制造商维修气动隔膜泵的心得
完善一下大家小型制氮机的知识面
全自动型沥青混合料车辙试验仪
免疫共沉淀Co-IP实验步骤
高低温试验箱使用常识
空腹吃番茄好吗？空腹吃番茄了怎么办
挑选半自动海鲜酱灌装机注意事项一起来看一下
精特散装水泥伸缩布袋的优势说明
防汛泵车中柴油发动机系统出现故障该如何处理
防爆探测器应用上日常生活中有八大特点
可见光紫外分光光度计仪器的日常维护
电力电缆故障测试仪的全配套图片、功能特点以及测试指标
醉酒驾驶司法鉴定血液酒精含量的标准
10-40千克农机肥料自动定量包装机厂家生产
影响超声波清洗机（器）清洗效果的因素
HYDAC贺德克温度继电器ETS388-5-150-000经销
内蒙古XMB-CT-1000窑炉气体在线分析仪供应商
凉水塔刷油漆 更换烟囱内衬
免疫共沉淀co-ip实验步骤
细胞转染
1.铺细胞，转染细胞。本次转染的两个蛋白分别带有flag和ha标签。
裂解细胞
2.去除培养基，pbs吹下细胞，离心去上清。将细胞沉淀转移到1.5mlep管中，pbs洗，离心去上清，加1ml裂解液。
3.冰上孵育40min，每10min震荡一次。
4.超声破碎细胞结构和打断染色质。冰上操作。
这个功率和时间要你自己摸索，不同细胞不同机器都会有差别，一般的国产机器对10^7细胞用20%功率超声4分钟左右即可比较充分（超声2秒，停2秒）。直到溶液相对比较清澈，没有丝状dna。
5. 4度，12000 rpm/min离心10mins。
6.转移上清(上清体积会有所增加，可能是因为细胞溶解了)到新的预冷的试管中。取50ul上清作为input。
7.将剩余样品分为两份,其中一份加入flag(mouse)抗体1ul（转染的蛋白带有flag标签），一份加入相应宿主的普通igg(mouse),4℃轻摇过夜，使抗体和目标蛋白充分结合。
抗体与beads的结合
8.将beads吸出至新管（每个107样品准备40ul beads悬液，约含20ul protein a/g beads，细胞较少时可适当减少，最少10ul悬液否则后续操作会很困难）用2倍体积(pbs+0.1%triton-100)洗涤3次，去上清。3000rpm离心1min基本可以充分沉淀，转速时间可调。
9.用等体积的buffer重悬beads。
10.在每个样品中加入20ul beads悬液，4℃轻摇2小时，使抗体和beads充分结合。
样品的收集和洗涤
11.将ip过后的样品离心3000rpm 1min。
12.将上清转移至新管 标记为flow through。
13.加入500ul (pbs+0.1%triton-100)洗涤beads4℃轻摇5min3000rpm 1min弃上清。
14.洗涤三次，最后一次尽量去除上清。
样品的洗脱
15.用30-100ul裂解液重悬beads，具体体积根据sds-page需求自定。
16.将样品和input中加入合适体积的loading buffer混匀，必要时可以将flow through进行制样检测。
17.95℃-100℃热变性10-15min，冷却后冻存备用。
18.sds-page和wb检测。ip用的是flag抗体，检测ha。
关于免疫共沉淀co-ip实验步骤，你还有什么疑问吗？
成套配电箱的安装注意事项
二次元三坐标测量机
分享气动隔膜泵制造商维修气动隔膜泵的心得
完善一下大家小型制氮机的知识面
全自动型沥青混合料车辙试验仪
免疫共沉淀Co-IP实验步骤
高低温试验箱使用常识
空腹吃番茄好吗？空腹吃番茄了怎么办
挑选半自动海鲜酱灌装机注意事项一起来看一下
精特散装水泥伸缩布袋的优势说明
防汛泵车中柴油发动机系统出现故障该如何处理
防爆探测器应用上日常生活中有八大特点
可见光紫外分光光度计仪器的日常维护
电力电缆故障测试仪的全配套图片、功能特点以及测试指标
醉酒驾驶司法鉴定血液酒精含量的标准
10-40千克农机肥料自动定量包装机厂家生产
影响超声波清洗机（器）清洗效果的因素
HYDAC贺德克温度继电器ETS388-5-150-000经销
内蒙古XMB-CT-1000窑炉气体在线分析仪供应商
凉水塔刷油漆 更换烟囱内衬