小鼠白细胞介素 13(il-13)elisa检测试剂盒操作步骤
检测原理
试剂盒采用双抗体夹心法酶联免疫吸附试验(elisa)。往预先包被小鼠白细胞介素 13(il-13)捕获抗体的包被微孔中,依次加入标本、标准品、hrp标记的检测抗体,经过温育并洗涤。用底物tmb显色,tmb在过氧化物酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的小鼠白细胞介素 13(il-13)呈正相关。用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度(od 值),计算样品浓度。
样品收集、处理及保存方法
1. 血清:使用不含热原和内毒素的试管,操作过程中避免任何细胞刺激,收集血液后,3000转离心10分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。
2. 血浆:edta、柠檬酸盐或肝素抗凝。3000转离心30分钟取上清。
3. 细胞上清液:3000转离心10分钟去除颗粒和聚合物。
4. 组织匀浆:将组织加入适量生理盐水捣碎。3000转离心10分钟取上清。
5. 保存:如果样本收集后不及时检测,请按一次用量分装,冻存于-20℃,避免反复冻融,在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。
自备物品
1.酶标仪(450nm)
2.高精度加样器及枪头:0.5-10ul、2-20ul、20-200ul、200-1000ul
3.37℃恒温箱
操作注意事项
1. 试剂盒保存在2-8℃,使用前室温平衡60分钟。从冰箱取出的浓缩洗涤液会有结晶,这属于正常现象,水浴加热使结晶溶解后再使用。样本在使用前也要在室温平衡60分钟。
2. 实验中不用的板条应立即放回自封袋中,密封(低温干燥)保存。
3. 预处理后的样本无需稀释,直接取10μl加样即可。
4. 严格按照说明书中标明的时间、加液量及顺序进行温育操作。
5. 所有液体组分使用前充分摇匀。
操作步骤
1. 从室温平衡60min后的铝箔袋中取出所需板条,剩余板条用自封袋密封放回4℃。
2. 设置标准品孔和样本孔,标准品孔各加不同浓度的标准品50μl;
3. 待测样本孔先加待测样本10μl,再加样本稀释液40μl;
4. 随后标准品孔和样本孔中每孔加入辣根过氧化物酶(hrp)标记的检测抗体100μl,用封板膜封住反应孔,37℃水浴锅或恒温箱温育60min。
5. 弃去液体,吸水纸上拍干,每孔加满洗涤液,静置1min,甩去洗涤液,吸水纸上拍干,如此重复洗板5次(也可用洗板机洗板)。
6. 每孔加入底物a、b各50μl,37℃避光孵育15min。
7. 每孔加入终止液50μl,15min内,在450nm波长处测定各孔的od值。
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