293T细胞培养攻略
293 [hek-293] 细胞是经人腺病毒5(ad5)转染而形成的人胚肾细胞永生化细胞系，293细胞包含并表达转染的ad5基因。293t细胞是293 [hek-293] 细胞株插入了sv40 t-antigen的温度敏感基因形成的高转衍生株，广泛用于病毒包装，呈上皮样，贴壁，营养体系是dmem+10% fbs。
表1 293t细胞基本信息
名称
293t [hek-293t] （人胚肾细胞）
形态
上皮样
生长特性
贴壁
营养体系
dmem（abs9483）+10% fbs（abs972）+1% 双抗（abs9478）
图1 293t [hek-293t] （人胚肾细胞）
一、首先我们讨论的是为啥293t细胞传代后聚团严重？如图2所示，背景贴壁细胞贴壁良好，形态正常，而黄色团块则是因为消化不当形成的细胞团，难以贴壁，并出现了成簇增殖。
图2 293t [hek-293t] （人胚肾细胞）
这种情况多半是胰酶消化操作不当导致的细胞聚团：
1）消化过度或吹打过猛导致细胞受伤严重，破损的细胞碎片容易粘连聚团；
2）消化时细胞融合率太高，成片脱落，将不容易被吹散，容易聚团。
解决细胞消化不当，要考虑细胞的生长特性，鉴于该细胞贴壁疏松，普通0.25%胰酶消化时间控制在15s-30s；吹打动作轻柔，控制在10-20次；细胞融合率达到80%传代即可传代。
二、接下来咱们要讨论的是为啥293t换了血清批次后聚团严重？如图3所示，换血清批次后严重聚团的293t细胞，细胞形态难以分辨，黏附在一起。
导致细胞聚团的因素很多，其一是血清批间差导致细胞聚团。血清来源于动物，其组成成分有1000种左右，且血清组成及含量常随供血动物的年龄、生理条件和营养条件而异。每个批号的组分百分比含量都是不固定的，所以批间差异是存在的。293t细胞本身有聚团生长特性，但严重聚团可能受到血清里的某些因子刺激。
图3 换血清批次后严重聚团的293t细胞
如何有效地预防血清批间差呢？可以通过先用血清试用装，试用效果好，可购买和血清试用装批次相同的正装，囤积半年或一年的用量，有效避免批间差对细胞的影响（胎牛血清在-20℃保存可达5年）。
三、接下来我们要讨论的是293t细胞贴壁性问题。通常有两种情况，
第一种情况是为啥用了新批号的血清，细胞贴壁性变差？如图4所示，贴壁疏松的293t细胞。
图4 贴壁疏松的293t细胞
这种情况大概率是血清存在批间差异，而293t细胞本身特点就是贴壁性差，对不同批次的血清适应性不同，就容易出现贴壁疏松现象。可适当加高血清比例（最高不超过20%）；建议试好一个血清批次多屯一些，可以避免血清批间差对细胞的影响。
第二种情况是为啥293t细胞从瓶里（例如t25）铺板到孔里（96孔板），贴壁性变差？这种情况排除掉瓶和孔板本身材质或tc（亲水处理）处理因素外，293t细胞贴壁性变差极有可能是因为空间的隔离导致细胞自分泌或旁分泌产生的信号分子浓度太低，不利于细胞的贴壁或增殖。建议在铺板前，对孔板进行明胶（abs9357）包被，可有效促进细胞贴壁。
四、最后咱们要讨论的是转染病毒后细胞凋亡严重，如图5所示，是经病毒转染后漂浮凋亡的293t细胞。
图5 经病毒转染后漂浮凋亡的293t细胞
为啥293t细胞转染病毒后凋亡严重？在排查了方法步骤和转染试剂，依然没有改善的情况下，可排查一下转染前的营养体系，尤其是血清批间差带来的影响。很多同学说前期培养细胞形态正常呀，其实细胞形态学只是鉴别细胞是否健康的一个外在指标，还要结合细胞其它指标对细胞健康进行评定（比如倍增时间，存活率）。通过更换血清批次，再进行转染实验并观察转染后的效果，比较分析出原因。
本期讲解就到这里了，下一期您想了解哪种细胞的培养攻略呢？欢迎留言评论哦。如有细胞培养问题，欢迎扫码加入我们微信群交流哦。
注：图源网络和客户，仅供参考学习用
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表2 细胞培养类产品推荐
货号
品名
规格
abs977
胎牛血清（特级）
500ml
abs972
胎牛血清（优级）
500ml
abs974
胎牛血清（标准级）
500ml
abs9483
高糖dmem培养基
500ml
abs9484
rpmi-1640培养基
500ml
abs9505
mem培养基
500ml
abs9506
α-mem培养基
500ml
abs9554
ham's f-12培养基
500ml
abs9563
ham's f-12k培养基
500ml
abs9561
dmem/f-12培养基
500ml
abs962
1 x pbs缓冲液
500ml
abs970
d-pbs缓冲液（不含 ca2+mg2+）
500ml
abs971
d-pbs缓冲液（含 ca2+mg2+）
500ml
abs9257
hanks平衡盐溶液（不含 ca2+mg2+）
500ml
abs9258
hanks平衡盐溶液（含 ca2+mg2+）
500ml
abs47014938
胰蛋白酶-edta消化液（0.25%） ，含酚红
100ml
abs47047375
胰蛋白酶-edta消化液（0.25%），不含酚红
100ml
abs9479
无dmso无血清细胞冻存液
100ml
abs9417
无血清细胞冻存液
100ml
abs9473
细胞冻存液（含血清）
100ml
abs9474
组织保存液
100ml
abs9480
组织冻存试剂盒
30ml
abs9486
模具
1个/套
abs9487
小刀
5片/包
abs9481
组织复苏试剂盒
50ml
abs42020125
卡那霉素b硫酸盐
250mg
abs42018967
硫酸庆大霉素溶液
10ml
abs9244
青霉素-链霉素溶液（100 x 双抗）
100ml
abs9245
青霉素-链霉素-庆大霉素混合溶液
100ml
abs42013298
两性霉素b
1g
abs44071148
制霉菌素
1g
abs9246
青霉素-链霉素-两性霉素b混合溶液
100ml
abs9252
支原体检测试剂盒
100t
abs9375
支原体清除试剂
200ul×5
abs9376
支原体预防
500ul×4
abs816578
环丙沙星盐酸盐
500mg
abs9374
水盘抑菌剂
20ml
abs9371
水浴锅抑菌剂
100ml
abs9372
培养箱除菌剂
480ml
abs9373
细胞房除菌剂
480ml
absin特色产品线：
wb相关：ecl发光液、预染marker、预制胶；ihc相关：二抗试剂盒、组化笔；ip/coip试剂盒；激动剂/抑制剂；血清、bsa、蛋白酶k、ctb、ttx、cee；凋亡试剂盒；呼吸爆发试剂盒；elisa试剂盒；重组蛋白；抗体: 二抗、标签抗体、对照抗体；定制服务(抗体/多肽/蛋白/标记/检测)...
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形态
上皮样
生长特性
贴壁
营养体系
dmem（abs9483）+10% fbs（abs972）+1% 双抗（abs9478）
图1 293t [hek-293t] （人胚肾细胞）
一、首先我们讨论的是为啥293t细胞传代后聚团严重？如图2所示，背景贴壁细胞贴壁良好，形态正常，而黄色团块则是因为消化不当形成的细胞团，难以贴壁，并出现了成簇增殖。
图2 293t [hek-293t] （人胚肾细胞）
这种情况多半是胰酶消化操作不当导致的细胞聚团：
1）消化过度或吹打过猛导致细胞受伤严重，破损的细胞碎片容易粘连聚团；
2）消化时细胞融合率太高，成片脱落，将不容易被吹散，容易聚团。
解决细胞消化不当，要考虑细胞的生长特性，鉴于该细胞贴壁疏松，普通0.25%胰酶消化时间控制在15s-30s；吹打动作轻柔，控制在10-20次；细胞融合率达到80%传代即可传代。
二、接下来咱们要讨论的是为啥293t换了血清批次后聚团严重？如图3所示，换血清批次后严重聚团的293t细胞，细胞形态难以分辨，黏附在一起。
导致细胞聚团的因素很多，其一是血清批间差导致细胞聚团。血清来源于动物，其组成成分有1000种左右，且血清组成及含量常随供血动物的年龄、生理条件和营养条件而异。每个批号的组分百分比含量都是不固定的，所以批间差异是存在的。293t细胞本身有聚团生长特性，但严重聚团可能受到血清里的某些因子刺激。
图3 换血清批次后严重聚团的293t细胞
如何有效地预防血清批间差呢？可以通过先用血清试用装，试用效果好，可购买和血清试用装批次相同的正装，囤积半年或一年的用量，有效避免批间差对细胞的影响（胎牛血清在-20℃保存可达5年）。
三、接下来我们要讨论的是293t细胞贴壁性问题。通常有两种情况，
第一种情况是为啥用了新批号的血清，细胞贴壁性变差？如图4所示，贴壁疏松的293t细胞。
图4 贴壁疏松的293t细胞
这种情况大概率是血清存在批间差异，而293t细胞本身特点就是贴壁性差，对不同批次的血清适应性不同，就容易出现贴壁疏松现象。可适当加高血清比例（最高不超过20%）；建议试好一个血清批次多屯一些，可以避免血清批间差对细胞的影响。
第二种情况是为啥293t细胞从瓶里（例如t25）铺板到孔里（96孔板），贴壁性变差？这种情况排除掉瓶和孔板本身材质或tc（亲水处理）处理因素外，293t细胞贴壁性变差极有可能是因为空间的隔离导致细胞自分泌或旁分泌产生的信号分子浓度太低，不利于细胞的贴壁或增殖。建议在铺板前，对孔板进行明胶（abs9357）包被，可有效促进细胞贴壁。
四、最后咱们要讨论的是转染病毒后细胞凋亡严重，如图5所示，是经病毒转染后漂浮凋亡的293t细胞。
图5 经病毒转染后漂浮凋亡的293t细胞
为啥293t细胞转染病毒后凋亡严重？在排查了方法步骤和转染试剂，依然没有改善的情况下，可排查一下转染前的营养体系，尤其是血清批间差带来的影响。很多同学说前期培养细胞形态正常呀，其实细胞形态学只是鉴别细胞是否健康的一个外在指标，还要结合细胞其它指标对细胞健康进行评定（比如倍增时间，存活率）。通过更换血清批次，再进行转染实验并观察转染后的效果，比较分析出原因。
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品名
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abs977
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500ml
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500ml
abs974
胎牛血清（标准级）
500ml
abs9483
高糖dmem培养基
500ml
abs9484
rpmi-1640培养基
500ml
abs9505
mem培养基
500ml
abs9506
α-mem培养基
500ml
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500ml
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500ml
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500ml
abs962
1 x pbs缓冲液
500ml
abs970
d-pbs缓冲液（不含 ca2+mg2+）
500ml
abs971
d-pbs缓冲液（含 ca2+mg2+）
500ml
abs9257
hanks平衡盐溶液（不含 ca2+mg2+）
500ml
abs9258
hanks平衡盐溶液（含 ca2+mg2+）
500ml
abs47014938
胰蛋白酶-edta消化液（0.25%） ，含酚红
100ml
abs47047375
胰蛋白酶-edta消化液（0.25%），不含酚红
100ml
abs9479
无dmso无血清细胞冻存液
100ml
abs9417
无血清细胞冻存液
100ml
abs9473
细胞冻存液（含血清）
100ml
abs9474
组织保存液
100ml
abs9480
组织冻存试剂盒
30ml
abs9486
模具
1个/套
abs9487
小刀
5片/包
abs9481
组织复苏试剂盒
50ml
abs42020125
卡那霉素b硫酸盐
250mg
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硫酸庆大霉素溶液
10ml
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青霉素-链霉素溶液（100 x 双抗）
100ml
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青霉素-链霉素-庆大霉素混合溶液
100ml
abs42013298
两性霉素b
1g
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制霉菌素
1g
abs9246
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100ml
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支原体检测试剂盒
100t
abs9375
支原体清除试剂
200ul×5
abs9376
支原体预防
500ul×4
abs816578
环丙沙星盐酸盐
500mg
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20ml
abs9371
水浴锅抑菌剂
100ml
abs9372
培养箱除菌剂
480ml
abs9373
细胞房除菌剂
480ml
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超纯水CEDI电源模块如何选择？
陈皮水分含量快速测定仪深圳生产厂家
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