液相色谱柱按色谱固定相基质的分类

液相色谱柱的空柱由柱接头、柱管及滤片组装而成。柱接头采用低死体积结构,柱接头是两端螺纹组件,一端是为7/16英寸内螺纹,另一端是3/16英寸的内螺纹(国内外已规范化)。7/16英寸内螺纹与1/4英寸柱管(φ6.35mm)连接,中间放置压环用于密封。3/16英寸的内螺纹与1/16英寸(φ1.57mm)的连接管连接,中间也放置压环用于柱接头的密封。为了尽量减少柱外死体积,在安装色谱柱时,用φ1.57mm连接管通过空心螺钉压环后要尽量插到底,然后再拧紧空心螺钉。压环被空心螺钉挤压变形后紧箍在连接管上(连接管通过压环后露出的管长度应严格控制在2.5mm长或其他固定尺寸)。
液相色谱柱在两端柱接头内,柱管两端各放置一片不锈钢滤片(或滤网),用于封堵柱填料不被流动相冲出柱外而流失。空柱各组件均为316l不锈钢材质,能耐受一般的溶剂作用。但由于含氯化物的溶剂对其有一定的腐蚀性,故使用时要注意,柱及连接管内不能长时间存留此类溶剂,以避免腐蚀。
液相色谱柱按色谱固定相基质的分类:
一.硅胶基质:
1.反相色谱柱:
反相色谱填料常是以硅胶为基础,表面键合有极性相对较弱的官能团的键合相。
反相色谱所使用的流动相极性较强,通常为水,缓冲液与甲醇,已腈等混合物。
样品流出色谱柱的顺序是极性较强组合zui先被冲出,而极性弱的组份会在色谱柱上有更强的保留。
常用的反相填料有c18(ods)、c8(mos)、c4(b)、c6h5(phenyl)等。
2.正相色谱:
正相色谱用的固定相通常为硅胶(silica),以及其他具有极性官能团,如胺基团(nh2,aps)和氰基团(cn,cps)的键合相填料。
由于硅胶表面的硅羟基(sioh)或其他团的极性较强,因此,分离的次序是依据样品中的各组份的极性大小,即极性强弱的组份zui先被冲洗出色谱柱。
正相色谱使用的流动相极性相对比固定相低,如:正乙烷(hexane),氯仿(chloroform),二氯甲烷(methylene chloride)等。
3.离子交换色谱柱:以磺化交联强阴/阳离子键合硅胶色谱柱,常用规格:强阴离子色谱柱(sax),强阳离子交换色谱柱(scx)
二 .聚合物基质:
聚合物调料多为聚苯乙烯-二乙烯基苯或聚甲基丙酸酯等,其主要优点是在ph值为1——14均可使用。相对与硅胶基质的c18填料,这类填料具有更强的疏水性;大孔的聚合物填料对蛋白质等样品的分离非常有效。现在的聚合物填料的缺点是相对硅胶基质填料,色谱柱柱效较低。
三.其他无机填料:
其它hplc的无机填料色谱柱也已经商品化。由于其特殊的性质,一般于特殊的用途。如石墨化碳也用于正逐渐成为反相色谱填料。这种填料的分离不同与硅胶基质烷基键合相,石墨化碳的表面即是保留的基础,不再需其它的表面改性,该柱填料一般比烷基键合硅胶或多孔聚合物填料的保留能力更强,石墨化碳可用于分离某些几何导构体,又由于hplc流动相中不会被溶解,这类柱可在任何ph与温度下使用。氧化铝也可用于hplc,
氧化铝微粒刚性强,可制成稳定的色谱柱柱床,其优点是可在ph高达12的流动相中使用。
但由于氧化铝与碱性化合物作用也很强,应用范围受到一定的限制,所以未能广泛应用,新型氧化锆填料也可用于hplc,商品化的仅有聚合物涂层的多孔氧化锆微球色谱柱,应用ph范围1——14,温度可达100℃。由于氧化锆填料几年才开始研究,加之面临的实验难度,其重要用途与优势尚在进行中。

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