duolink® pla试剂
有关具体的产品建议,请参阅duolink® pla产品选择指南。简单来说,要运行用于荧光检测的duolink® plp实验,需要以下duolink® pla产品:
一、duolink® pla探针(一种plus和一种来自不同物种的minus,与您的一抗宿主物种相匹配)。每个试剂盒包括:
1.pla探针(5x)— plus和/或minus,取决于产品;
2.封闭溶液 — 用于在孵育抗体前封闭样品;
3.抗体稀释剂 — 用于稀释pla探针,而且如果需要,用于稀释一抗。
注意:将试剂盒的所有组分存放在4°c温度下。
注意:如果需要,可用duolink® pla试剂盒生成定制的pla探针。
二、duolink®荧光检测试剂(可选择绿色、橙色、红色等)
每个试剂盒包括:
1.连接原液(5x) – 稀释以制备1x连接缓冲液
2.连接酶 (1 u/μl) – 添加以制备连接溶液
3.扩增原液 (5x) – 稀释以制备1x扩增缓冲液
4.聚合酶 (10 u/μl) - 添加以制备扩增溶液
注意:将所有组分存放在-20°c温度下。
三、荧光用洗涤缓冲液。
四、含dapi的duolin封固剂用于载玻片,储存在2-8°c)或者细胞核染色剂和抗淬灭剂(用于微孔板,储存在-20°c)
其他材料!
1.检测目标蛋白质的一抗。当与duolink® pla探针一起使用时,必须在小鼠、兔子或山羊中饲养。
2.高纯度纯水(无菌过滤,milli-q®或类似水质)
3.载玻片上的样品(细胞或组织),已经过固定、恢复和透化方面的预处理。关于下列主题的相关建议和详细信息,请参阅如何优化duolink®邻近连接测定:
1.实验设计和对照
2.选择一抗和优化
3.样品处理
设备
1.荧光显微镜,带有适当的滤光片、照相机和图像采集软件
2.37°c培养箱
3.水平摇床
4.加热湿度箱或微孔板传热座
5.疏水笔,用于给反应区域划界
6.冰块(用于酶)
7.染色罐
8.镊子
9.移液器和吸头(1 μl至1000 μl)
10.与荧光显微镜兼容的盖玻片
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