研究表明,通过采用sc-icp-ms 方法,能够测定细胞内金属成分、定量分析金属及金属掺杂药物、纳米粒子的细胞摄取率。
在本文中,我们证明了,在单个细胞基础上通过perkinelmer 的nexion®2000 单细胞icp-ms 解决方案来量化癌细胞的金纳米粒子摄取量。该技术能够准确定量出含金纳米粒子(aunp)的细胞数,还能够分析每单个癌细胞中的aunp 数,给出细胞群的摄取分布。
方法
通过表1 所示条件,在nexion 2000 icp-ms 上运行syngistix 软件下的单细胞应用模块,完成所有样品分析。图1 显示了用于sc-icp-ms 分析的组件,包括nexion
2000 asperon™ 雾化室以及的单细胞进样微型dx自动取样器。asperon 雾化室旨在尽可能将细胞传送到nexion,而单细胞微型dx 自动取样器则在分析前搅动细胞悬浊液,以确保细胞不会从溶液中沉淀出来。
t24 癌细胞摄取量
将人类t24 膀胱癌细胞用作癌细胞模型,以量化暴露于聚乙二醇化aunp 时的细胞纳米颗粒摄取量。采用0.4nm 聚乙二醇化的aunp,培养t24 癌细胞4 小时。用1xpbs 大量洗涤以去除多余的aunp 后,用4% 多聚甲醛将t24 癌细胞固定,形成单细胞悬浮液。对于定量每个
细胞的aunp 数,sc-icp-ms 分析结果显示,每个细胞的aunp 分布范围为每个细胞摄取1 到5 个aunp(图5)根据图5 所示数据,合乎逻辑的下一步是,通过sc-icp-ms,研究观察到的纳米颗粒于细胞分布的原因和潜在的生物学机制。换句话说,为什么某些细胞比其他细胞会摄取更多aunp ?这一点很重要,因为aunp 是很有前景的纳米材料,并且越来越多用于癌症治疗的诊断和治疗应用。4,13 由于缺乏有效的分析工具,文献中关于aunp 如何与单个癌细胞相互作用的量化信息有限。通过量化单细胞(一次一个完整细胞)的细胞内元素浓度,sc-icp-ms(一种允许将完整的单个细胞导入高灵敏度icp-ms 的技术)提供了获得这一重要信息的分析方法。
结论
在本研究中,我们通过单细胞icp-ms 分析方法,在单个细胞水平上定量癌细胞的aunp 摄取量。结果表明,每个细胞吸收的aunp 分布并不均匀,特定细胞群内的某些细胞比其他细胞明显摄取更多aunp。sc-icp-ms 是一个强大的分析工具,可在单个细胞水平上量化元素浓度和纳米粒子的分布。这项技术在单细胞基础上,具有提供的纳米粒子- 细胞相互作用差异新见解的潜力。
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