荧光定量pcr仪工作原理
将标记有荧光素的taqman探针与模板dna混合后，完成高温变性，低温复性，适温延伸的热循环，并遵守聚合酶链反应规律，与模板dna互补配对的taqman探针被切断，荧光素游离于反应体系中，在特定光激发下发出荧光，随着循环次数的增加，被扩增的目的基因片段呈指数规律增长，通过实时检测与之对应的随扩增而变化荧光信号强度，求得ct值，同时利用数个已知模板浓度的标准品作对照，即可得出待测标本目的基因的拷贝数。
ct值（cyclethreshold，循环阈值）的含义为：每个反应管内的荧光信号到达设定阈值时所经历的循环数。
1. 荧光阈值（threshold）的设定
pcr反应的前15个循环的荧光信号作为荧光本底信号，荧光阈值的缺省（默认）设置是3-15个循环的荧光信号的标准偏差的10倍，即：threshold= 10*sdcycle 3-15
2. ct值与起始模板的关系
每个模板的ct值与该模板的起始拷贝数的对数存在线性关系，公式如下。
ct=-1/lg(1+ex)*lgx0+lgn/lg(1+ex)
n为扩增反应的循环次数，x0为初始模板量，ex为扩增效率，n为荧光扩增信号达到阈值强度时扩增产物的量。
起始拷贝数越多，ct值越小。利用已知起始拷贝数的标准品可作出标准曲线，其中横坐标代表起始拷贝数的对数，纵坐标代ct值。因此，只要获得未知样品的ct值，即可从标准曲线上计算出该样品的起始拷贝数。
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