PCR的循环参数具体介绍
pcr反应循环参数是指在聚合酶链式反应中，循环参数中退火温度和时间、延伸时间及pcr缓冲液的成分影响多重pcr的扩增效果，而反应体积、循环次数对其扩增效果影响较小。多重pcr(mutiplex pcr)技术因具有高效、高产率、能降低实验成本、加速实验进程等优点，要求不同引物能在同一反应体系中进行特异性扩增, 因而影响其扩增效果的因素较多, 主要有循环参数、反应体积、反应体系、引物间的碱基配对等 。pcr的循环参数具体介绍：
1. 预变性（initial denaturation）
模板dna*变性与pcr酶的*激活对pcr能否成功至关重要，建议加热时间参考试剂说明书，一般未修饰的taq酶激活时间为两分钟。
2. 循环中的变性步骤
循环中一般95℃，30秒足以使各种靶dna序列*变性，可能的情况下可 缩短该步骤时间，变性时间过长损害酶活性，过短靶序列变性不*，易造成扩增失败。
3. 引物退火（primer annealing）
退火温度需要从多方面去决定，一般根据引物的tm值为参考，根据扩增的长度适当下调作为退火温度。然后在此次实验基础上做出预估。
退火温度对pcr的特异性有较大影响。
4. 引物延伸
引物延伸一般在72℃进行（taq酶最适温度）。但在扩增长度较短且退火温度较高时，本步骤可省略
延伸时间随扩增片段长短而定，一般推荐在1000 bp以上，含pfu及其衍生物的衍生设定为1 min/kbp。
5. 循环数
大多数pcr含25-40循环，过多易产生非特异扩增。
6. 最后延伸
在最后一个循环后，反应在72℃维持5-15分钟．使引物延伸*，并使单链产物退火成双链。
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