GUS染色液使用说明书
gus染色液使用说明书
【产品组成】
component
sbj-0569s
110ml
store at
试剂(a):gus buffer a
50ml
室温
试剂(b):gus buffer b
1ml
4℃,避光
试剂(c):gus buffer c
1ml
4℃,避光
试剂(d):2×fixation buffer
25ml
室温,避光
试剂(e):x-glca
80mg
-20℃,避光
试剂(f):x-glca solvent
1ml
室温,避光
试剂(g):deionized water
110ml
室温
【保存条件】
-20℃,避光;4℃,避光,12个月
【产品概述】
gus(β-galactosidase)基因是存在于e.coli等一些细菌基因组内的编码β-葡萄糖苷酸酶的一种水解酶，该基因常作为融合标记用于植物转基因分析和调控研究中。gus受体基因系统有表达e.coligus酶的稳定性和在植物内的低活性，绝大多数植物没有检测到葡萄糖苷酸酶的背景活性，以β-葡萄糖苷酸酯类物质为底物，其反应产物可用多种方法检测出来。5-bromo-chloro-3-indolylβ-d-glucuronide，cyclohexylammonium salt(简称为x-gluc或x-glca)分子量为521.8，cas号为18656-96-7，是检测大肠杆菌中gus基因的底物，可快速检测植物中gus基因融合标记。
β-葡萄糖苷酶基因染色试剂盒(β-galactosidase reporter gene staining kit)简称为gus染色液，其染色原理是适宜的反应条件下β-葡萄糖苷酶(gus)可将x-gluc水解成蓝色物质，该物质不溶解于转基因的细胞核组织中的靛蓝物质，具有gus活性的部位或位点呈现蓝色或蓝色斑点，可用肉眼或显微镜观察到，gus染色液可用于生物化学活性分析、免疫分析以及组织和细胞的组织化学染色，多用于转基因植物的gus基因表达分析。该试剂仅用于科研领域，不适用于临床诊断或其他用途。
【使用方法】
1、配制x-glca solution：取x-glca solvent 229μl加入至80mg x-glca中或取适量上述2种物质溶解，使其浓度达到350mg/ml，轻轻vortex混匀，即为solution，分装后，-20℃避光保存。
2、按下列比例配制gus染色液：
组分
体积
gus buffer a
2.5ml
gus buffer b
40μl
gus buffer c
40μl
deionized water
5.4ml
甲醇
2ml
x-glca solution
20μl
tatal volume
～10ml
3、固定(固定不是必须的步骤，如果不需要固定，直接进行操作步骤4)：
①取转基因植物组织，入3～5ml清洁小瓶或多孔板中。
②取适量2×fixation buffer与去离子水等量稀释即获得1×fixation buffer，加入1×fixation buffer使其*浸没组织，室温孵育45～60min，弃液。
③配制洗涤液：按gus buffer a:去离子水=1:20稀释即为洗涤液，用配制好的洗涤液漂洗3次，每次1min。
4、加入适量gus染色液，使gus染色液*浸没组织。
5、(备选)用真空泵抽取小瓶或多孔板中的气体，抽取时间应大于2min；该步骤是非必需步骤，目的是为了抽取植物组织内的气体，并使染色液更容易进入组织内。
6、立即盖紧瓶子或多孔板，37℃孵育24h；随着孵育时间的延长，蓝色渐渐出现，当表达量较高时，gus活性的部位或位点呈现蓝色或蓝色斑点。
7、用乙醇脱去样本的叶绿素，一般样本浸没于乙醇1～3h；如有必要可重复该脱色步骤，以便*清除叶绿素；样本保存于乙醇中可用肉眼或普通光学显微镜下观察。
【注意事项】
1、gus染色液建议冰上配制，可以4℃避光保存3天。
2、减少gus buffer b、c的使用量会提高检测特异性(即减少假阳性)，但常会导致无阳性结果，gus buffer b、c的使用量一般控制在4～40μl/10ml。
3、x-glca solution应避免反复冻融，否则染色效率会下降。
4、由于组织特异性等原因，蓝色颜色反应可能不*一致，应注意摸索具体实验条件。
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50ml
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1ml
4℃,避光
试剂(c):gus buffer c
1ml
4℃,避光
试剂(d):2×fixation buffer
25ml
室温,避光
试剂(e):x-glca
80mg
-20℃,避光
试剂(f):x-glca solvent
1ml
室温,避光
试剂(g):deionized water
110ml
室温
【保存条件】
-20℃,避光;4℃,避光,12个月
【产品概述】
gus(β-galactosidase)基因是存在于e.coli等一些细菌基因组内的编码β-葡萄糖苷酸酶的一种水解酶，该基因常作为融合标记用于植物转基因分析和调控研究中。gus受体基因系统有表达e.coligus酶的稳定性和在植物内的低活性，绝大多数植物没有检测到葡萄糖苷酸酶的背景活性，以β-葡萄糖苷酸酯类物质为底物，其反应产物可用多种方法检测出来。5-bromo-chloro-3-indolylβ-d-glucuronide，cyclohexylammonium salt(简称为x-gluc或x-glca)分子量为521.8，cas号为18656-96-7，是检测大肠杆菌中gus基因的底物，可快速检测植物中gus基因融合标记。
β-葡萄糖苷酶基因染色试剂盒(β-galactosidase reporter gene staining kit)简称为gus染色液，其染色原理是适宜的反应条件下β-葡萄糖苷酶(gus)可将x-gluc水解成蓝色物质，该物质不溶解于转基因的细胞核组织中的靛蓝物质，具有gus活性的部位或位点呈现蓝色或蓝色斑点，可用肉眼或显微镜观察到，gus染色液可用于生物化学活性分析、免疫分析以及组织和细胞的组织化学染色，多用于转基因植物的gus基因表达分析。该试剂仅用于科研领域，不适用于临床诊断或其他用途。
【使用方法】
1、配制x-glca solution：取x-glca solvent 229μl加入至80mg x-glca中或取适量上述2种物质溶解，使其浓度达到350mg/ml，轻轻vortex混匀，即为solution，分装后，-20℃避光保存。
2、按下列比例配制gus染色液：
组分
体积
gus buffer a
2.5ml
gus buffer b
40μl
gus buffer c
40μl
deionized water
5.4ml
甲醇
2ml
x-glca solution
20μl
tatal volume
～10ml
3、固定(固定不是必须的步骤，如果不需要固定，直接进行操作步骤4)：
①取转基因植物组织，入3～5ml清洁小瓶或多孔板中。
②取适量2×fixation buffer与去离子水等量稀释即获得1×fixation buffer，加入1×fixation buffer使其*浸没组织，室温孵育45～60min，弃液。
③配制洗涤液：按gus buffer a:去离子水=1:20稀释即为洗涤液，用配制好的洗涤液漂洗3次，每次1min。
4、加入适量gus染色液，使gus染色液*浸没组织。
5、(备选)用真空泵抽取小瓶或多孔板中的气体，抽取时间应大于2min；该步骤是非必需步骤，目的是为了抽取植物组织内的气体，并使染色液更容易进入组织内。
6、立即盖紧瓶子或多孔板，37℃孵育24h；随着孵育时间的延长，蓝色渐渐出现，当表达量较高时，gus活性的部位或位点呈现蓝色或蓝色斑点。
7、用乙醇脱去样本的叶绿素，一般样本浸没于乙醇1～3h；如有必要可重复该脱色步骤，以便*清除叶绿素；样本保存于乙醇中可用肉眼或普通光学显微镜下观察。
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