百萤-Cy3 酪胺产品实验方案详情
cy7酪胺是美国aat bioquest生产的cy系列产品，对于许多免疫组织化学（ihc）应用，传统的酶促扩增程序足以实现足够的抗原检测。但是，有几个因素限制了这些程序的敏感性和实用性。百萤生物是aat bioquest的中国代理商，为您提供优质的cy7酪胺。
适用仪器
荧光显微镜
ex:
cy3/tritc滤波片
em：
cy3/tritc滤波片
推荐孔板:
黑色透明底板
滤波片:
cy3/tritc滤波片
实验方案
样品染色示例
概述
1.固定/透化/阻断细胞或组织
2.在封闭缓冲液中加入一抗
3.加入hrp偶联的二抗
4.准备酪胺工作溶液，在室温下在细胞或组织中施用5-10分钟
操作步骤
在没有额外说明的情况下，所有未使用的储备溶液应分成一次性等分试样，并在制备后储存在-20°c，避免反复冻融循环。该方案适用于细胞和组织染色。
1.制备储存溶液
tyramide原液（1000x）加入适量的dmso，制成1-5mm的酪胺储备液。
注意：未使用的tyramide原液可以在2-8℃下储存
2.制备工作溶液
tyramide工作溶液（1x）：
将1μltyramide原液加入1 ml含有0.003％h2o2的缓冲液中。
注意：tris buffer，ph = 7.4时可用于获得佳性能。
注意：tyramide工作溶液应立即使用。
3.细胞固定和透化
4.3.1在室温下用pbs中的3.7％甲醛或多聚甲醛固定细胞或组织20分钟。
3.2用pbs冲洗细胞或组织两次。
3.3在室温下用0.1％triton x-100溶液使细胞透化1-5分钟。
3.4用pbs冲洗细胞或组织两次。
注意：组织固定，脱蜡和再水化，根据标准ihc方案对组织进行脱蜡和脱水。根据需要使用优选的特定溶液/方案进行抗原修复。
4.过氧化物酶标记
4.1任选：通过在过氧化物酶猝灭溶液（例如3％过氧化氢）中孵育细胞或组织样品10分钟来淬灭内源性过氧化物酶活性，在室温下用pbs冲洗两次。
4.2可选：如果使用hrp偶联的链霉抗生物s蛋白，建议通过生物s阻断缓冲液阻断内源性生物s。
4.3用优选的封闭溶液（例如含有1％bsa的pbs）在4℃下封闭30分钟。
4.4取出封闭溶液，加入在推荐抗体稀释液中稀释的一抗在室温下60分钟或在4°c下过夜。
4.5用pbs洗涤三次，每次5分钟。
4.6向每个样品中加入100μl二抗-hrp工作溶液，在室温下孵育60分钟。
注意孵育时间和浓度可根据信号强度而变化。
4.7用pbs洗涤三次，每次5分钟。
5.酪胺标记
5.1为每个样品准备并应用100μl酪胺工作溶液，并在室温下孵育5-10分钟。
注意：如果您观察到非特异性信号，可以缩短酪胺的孵育时间。您应该在不同的孵育时间点使用阳性和阴性对照样品优化孵育期。或者您可以在工作溶液中使用较低浓度的酪胺。
5.2用pbs冲洗三次。
6.荧光成像
1.根据需要对细胞或组织样本进行计数。aat提供了一系列细胞核复染试剂，如表1所列。按照试剂提供的说明进行操作。
2.使用具有抗褪色特性的安装介质安装盖玻片。
3.使用适当的过滤器组可视化来自酪胺标签的信号。
表1.推荐用于核复染的产品
货号
产品名称
ex/em(nm)
17548
nuclear blue dcs1
350/461
17550
nuclear green dcs1
503/526
17551
nuclear orange dcs1
528/576
17552
nuclear red dcs1
642/660
关键词：荧光显微镜
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适用仪器
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ex:
cy3/tritc滤波片
em：
cy3/tritc滤波片
推荐孔板:
黑色透明底板
滤波片:
cy3/tritc滤波片
实验方案
样品染色示例
概述
1.固定/透化/阻断细胞或组织
2.在封闭缓冲液中加入一抗
3.加入hrp偶联的二抗
4.准备酪胺工作溶液，在室温下在细胞或组织中施用5-10分钟
操作步骤
在没有额外说明的情况下，所有未使用的储备溶液应分成一次性等分试样，并在制备后储存在-20°c，避免反复冻融循环。该方案适用于细胞和组织染色。
1.制备储存溶液
tyramide原液（1000x）加入适量的dmso，制成1-5mm的酪胺储备液。
注意：未使用的tyramide原液可以在2-8℃下储存
2.制备工作溶液
tyramide工作溶液（1x）：
将1μltyramide原液加入1 ml含有0.003％h2o2的缓冲液中。
注意：tris buffer，ph = 7.4时可用于获得佳性能。
注意：tyramide工作溶液应立即使用。
3.细胞固定和透化
4.3.1在室温下用pbs中的3.7％甲醛或多聚甲醛固定细胞或组织20分钟。
3.2用pbs冲洗细胞或组织两次。
3.3在室温下用0.1％triton x-100溶液使细胞透化1-5分钟。
3.4用pbs冲洗细胞或组织两次。
注意：组织固定，脱蜡和再水化，根据标准ihc方案对组织进行脱蜡和脱水。根据需要使用优选的特定溶液/方案进行抗原修复。
4.过氧化物酶标记
4.1任选：通过在过氧化物酶猝灭溶液（例如3％过氧化氢）中孵育细胞或组织样品10分钟来淬灭内源性过氧化物酶活性，在室温下用pbs冲洗两次。
4.2可选：如果使用hrp偶联的链霉抗生物s蛋白，建议通过生物s阻断缓冲液阻断内源性生物s。
4.3用优选的封闭溶液（例如含有1％bsa的pbs）在4℃下封闭30分钟。
4.4取出封闭溶液，加入在推荐抗体稀释液中稀释的一抗在室温下60分钟或在4°c下过夜。
4.5用pbs洗涤三次，每次5分钟。
4.6向每个样品中加入100μl二抗-hrp工作溶液，在室温下孵育60分钟。
注意孵育时间和浓度可根据信号强度而变化。
4.7用pbs洗涤三次，每次5分钟。
5.酪胺标记
5.1为每个样品准备并应用100μl酪胺工作溶液，并在室温下孵育5-10分钟。
注意：如果您观察到非特异性信号，可以缩短酪胺的孵育时间。您应该在不同的孵育时间点使用阳性和阴性对照样品优化孵育期。或者您可以在工作溶液中使用较低浓度的酪胺。
5.2用pbs冲洗三次。
6.荧光成像
1.根据需要对细胞或组织样本进行计数。aat提供了一系列细胞核复染试剂，如表1所列。按照试剂提供的说明进行操作。
2.使用具有抗褪色特性的安装介质安装盖玻片。
3.使用适当的过滤器组可视化来自酪胺标签的信号。
表1.推荐用于核复染的产品
货号
产品名称
ex/em(nm)
17548
nuclear blue dcs1
350/461
17550
nuclear green dcs1
503/526
17551
nuclear orange dcs1
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