DNA甲基化检测（重亚硫酸盐处理）试剂盒
dna甲基化检测（重亚硫酸盐处理）试剂盒
dna甲基化是一种基本的表观遗传学修饰，在基因表达调控、发育调节、基因组印迹等方面发挥重要作用。在dna甲基转移酶的催化下，cpg双核苷的胞嘧啶第5位碳原子被选择性地添加甲基基团。 在人类肿瘤中，普遍发生甲基化异常的现象，由于甲基化与胚胎发育、细胞周期调控相关，因此dna甲基化状态的变化可作为疾病诊断和预后的一个有用的指示器。
最早在1970年，重亚硫酸盐转化就被用于鉴别dna中的胞嘧啶和5-甲基胞嘧啶（5-mc）。现在认为在重亚硫酸盐处理过程中，5-甲基胞嘧啶（5-mc）和5-羟甲基胞嘧啶（5-hmc）都不会发生碱基的变化，因此这种方法不能用来区别不同的甲基化修饰。在重亚硫酸盐转化过程中，dna首先用重亚硫酸钠处理，在高温和低ph条件下，将变性dna（单链dna）中的胞嘧啶转化为胞嘧啶-重亚硫酸盐衍生物，这个反应是可逆的；接下来胞嘧啶-重亚硫酸盐衍生物发生不可逆的水解脱氨基过程，形成尿嘧啶-重亚硫酸盐衍生物。最后在高ph条件下尿嘧啶-重亚硫酸盐衍生物脱磺酸基形成尿嘧啶。只有未甲基化的胞嘧啶在重亚硫酸盐处理下发生碱基变化，5-mc和5-hmc仍然保持不变。转化处理后的dna经pcr扩增，尿嘧啶（u）转变为胸腺嘧啶（t）。重亚硫酸盐转化示意图如下：
图1重亚硫酸盐处理将未甲基化的胞嘧啶转化为尿嘧啶
active motif公司的bisulfite conversion kit提供优化的转化试剂、简单易用的操作步骤以及阳性对照pcr引物，简化了dna甲基化检测的过程。整个转化可在1.5小时之内完成，转化效率高达99%。试剂盒提供转化特异性pcr引物，可用于测序前验证重亚硫酸盐转化效率。阳性对照pcr引物适用于重亚硫酸盐转化处理的人和小鼠dna，经pcr扩增可得到220 bp的产物。
active motif同时也提供methyldetector™重亚硫酸盐修饰试剂盒，该试剂盒是active motif公司最初提供的一款dna甲基化检测试剂盒，原理和bisulfite conversion kit一样，但转化时间需要5小时。
图2 bisulfite conversion kit操作流程
使用bisulfite conversion kit，将目的dna用蛋白酶k处理，加入重亚硫酸盐转化试剂和dna变性剂，在温度循环仪中进行快速热变性。经过1.5小时的dna转化反应，样品加入到试剂盒里的dna纯化柱，脱盐后洗脱dna，可用于pcr或其他的下游实验。
图3阳性对照转化特异性pcr引物可用于特异性扩增转化后的人和小鼠dna
使用bisulfite conversion kit处理人（a）和小鼠（b）基因组dna，处理（bis）和未处理（untr）的dna分别用阳性对照转化特异性pcr引物进行pcr扩增分析。阳性对照pcr引物专门适用于经重亚硫酸盐转化的dna，因此会扩增出220bp的条带，而未处理的dna没有扩增出相应条带。
供货商
产品编号
产品名称
规格
active motif
55016
bisulfite conversion kit
50 rxns
active motif
55001
methyldetector™
50 rxns
active motif
55003
fully methylated jurkat dna
10 µg
active motif
55007
jurkat genomic dna
10 µg
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