免疫组化的二抗有区别吗！怎么选择呢？
免疫组化大家基本上都做过，你知道有二抗，也应该知道免疫组化的原理就是一抗结合到目标蛋白，再有二抗来进行信号放大，大概是这样：
但是你知道二抗的信号放大实际上有多种方法……这就需要你进行二抗标记方法的选择，简单的二抗标记方法是直接法：
就是直接在二抗上标记酶，比如hrp，来进行显色，这样的二抗实际上很便宜，但是缺点就是灵敏度低，好多低丰度的蛋白，结合不上，免疫组化染出来的效果就不太好。
第二种方法，叫做pap，比如二抗标记了hrp，他们就在孵育二抗后，再孵育一种能结合hrp的一抗，就像这样：
这种方法灵敏度是上去了，但是非特异性增高了，于是被主流淘汰了。
第三种方法被称为abc法或者sabc法，主要是在二抗上标记生物素，孵育二抗后，加入亲和素以及标记了hrp的生物素，以这样的聚合方式，来进行信号的放大作用：
这种方法的优点是能够成倍提高灵敏度，但同时也会提高非特异性，于是就产生了第四种方法，lsab法标记的二抗：
这种方法，直接在亲和素上加上hrp标记，灵敏度也很高，同时降低了sabc法的非特异性。而且，lsab法在实验的时一般孵育时间短（通常就10分钟）。
但sabc法和lsab法在实验过程中会需要进行内源生物素封闭，会麻烦一些。为了省去麻烦，就产生了第五种标记方法，也就是polymer法，就是在二抗上标记聚合的hrp：
这样二抗的信号就得到了放大，灵敏度也提高了，但polymer法、sabc法、lsab法，都不能用于定量实验，只能用在ihc上。
那免疫荧光呢？免疫荧光主流是采用直接法、lsab法，以及直接标记或者lsab标记的三抗来进行信号放大的。总结一下，就是直接法的二抗便宜但是灵敏度差；pap法基本已经淘汰，lsab和sabc法的灵敏度高，但是贵，步骤多；polymer法灵敏度高，步骤简单，但是贵。
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就是直接在二抗上标记酶，比如hrp，来进行显色，这样的二抗实际上很便宜，但是缺点就是灵敏度低，好多低丰度的蛋白，结合不上，免疫组化染出来的效果就不太好。
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但sabc法和lsab法在实验过程中会需要进行内源生物素封闭，会麻烦一些。为了省去麻烦，就产生了第五种标记方法，也就是polymer法，就是在二抗上标记聚合的hrp：
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