如何解决HPLC色谱峰峰型异常问题？
异常的色谱峰指的是色谱图中的无峰或出现负峰、宽峰、双峰、肩峰、峰形不对称等情况。异常峰是色谱实验工作中zui棘手的问题。这些峰严重影响色谱分析的结果。色谱图中不可能有纯正的高斯对称峰 , 轻微的拖尾是正常的 , 这是由分离系统所决定的。在此仅对几种异常峰进行分析。
1. 色谱图中未出峰
系统未进样或样品分解；泵未输液或流动相使用不正确；检测器设置不正确；针对以上情况成因作相应调整即可。
2. 一个峰或几个峰是负峰
流动相吸收本底高；进样过程中进入空气；样品组分的吸收低于流动相。
3. 所有峰均为负峰
信号电缆接反或检测器输出极性设置颠倒；光学装置尚未达到平衡。
4. 所有峰均为宽峰
系统未达到平衡；溶解样品的溶剂极性比流动相差很多；色谱柱尺寸及类型选择不正确；色谱柱或保护柱被污染或柱效降低；温度变化造成的影响。
5. 所出峰比预想的小
样品黏度过大；进样品故障或进样体积误差；检测器设置不正确.定量环体积不正确；检测池污染；检测器灯出现问题。
6. 出现双峰或肩峰
进样量过大；样品浓度过高；保护柱或色谱柱柱头堵塞；保护拄或色谱柱污染或失效；柱塌陷或形成短通道。
7. 前伸峰
进样量或样品浓度高，溶解样品的溶剂较流动相极性强；保护柱或色谱柱污染或失效。
①柱温低：升高柱温；②样品溶剂选择不恰当：使用流动相作为样品溶剂；③样品过载：降低样品含量；④色谱柱损坏：更换柱子。
8. 拖尾峰
柱超载，降低样品量；增加柱直径采用较高容量的固定相；峰干扰，对样品进行清洁过滤；调整流动相；硅羟基作用，加入三乙胺，用碱致钝化柱增加缓冲液或盐的浓度降低流动相ph值；柱内烧结不锈钢失效，更换烧结不锈钢；加在线过滤器，对样品进行过滤；死体积或柱外体积过大，将连接点降至zui低；尽可能使用内径较细的连接管；柱效下降，更换柱子；采用保护柱，对柱子进行再生。
9. 出现平头峰
检测器设置不正确；进样体积太大或样品浓度太高。
10. 出现鬼峰
进样阀残余峰，可能为上次样品的残余。在每次进完样后用充足的时间来平衡和清洗系统；样品中存在未知物，改进样品的预处理；流动相污染，更换新流动相，尽可能现配现用，隔夜的流动相再次使用时要过滤；尽可能使用hplc级试剂；流路中有小的气泡，打开purge阀，加大流速排除。
11. 峰分叉
①保护柱或分析柱污染：取下保护柱再进行分析,如果必要更换保护柱。如果分析柱阻塞,拆下来清洗。如果问题仍然存在,可能是柱子被强保留物质污染,运用适当的再生措施。如果问题仍然存在,入口可能被阻塞,更换筛板或更换色谱柱。②样品溶剂不溶于流动相改变样品溶剂,如果可能采取流动相作为样品溶剂。
12. 峰变形
样品过载，减少样品载量。
13. 早出的峰变形
样品溶剂选择不恰当 ①减少进样体积 ②运用低极性样品溶剂
14. 早出的峰拖尾程度大于晚出的峰
柱外效应 ①调整系统连接(使用更短、内径更小的管路) ②使用小体积的流通池
15. 酸性或碱性化合物的峰拖尾
缓冲不合适①使用浓度50～100 mm的缓冲液②使用pka等于流动相ph值的缓冲液
16. 额外的峰
(1)样品中有其他组分：正常现象；
(2)前一次进样的洗脱峰：①增加运行时间或梯度斜率②提高流速；
(3)空位或鬼峰：①检查流动相是否纯净 ②使用流动相作为样品溶剂 ③减少进样体积。
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1. 色谱图中未出峰
系统未进样或样品分解；泵未输液或流动相使用不正确；检测器设置不正确；针对以上情况成因作相应调整即可。
2. 一个峰或几个峰是负峰
流动相吸收本底高；进样过程中进入空气；样品组分的吸收低于流动相。
3. 所有峰均为负峰
信号电缆接反或检测器输出极性设置颠倒；光学装置尚未达到平衡。
4. 所有峰均为宽峰
系统未达到平衡；溶解样品的溶剂极性比流动相差很多；色谱柱尺寸及类型选择不正确；色谱柱或保护柱被污染或柱效降低；温度变化造成的影响。
5. 所出峰比预想的小
样品黏度过大；进样品故障或进样体积误差；检测器设置不正确.定量环体积不正确；检测池污染；检测器灯出现问题。
6. 出现双峰或肩峰
进样量过大；样品浓度过高；保护柱或色谱柱柱头堵塞；保护拄或色谱柱污染或失效；柱塌陷或形成短通道。
7. 前伸峰
进样量或样品浓度高，溶解样品的溶剂较流动相极性强；保护柱或色谱柱污染或失效。
①柱温低：升高柱温；②样品溶剂选择不恰当：使用流动相作为样品溶剂；③样品过载：降低样品含量；④色谱柱损坏：更换柱子。
8. 拖尾峰
柱超载，降低样品量；增加柱直径采用较高容量的固定相；峰干扰，对样品进行清洁过滤；调整流动相；硅羟基作用，加入三乙胺，用碱致钝化柱增加缓冲液或盐的浓度降低流动相ph值；柱内烧结不锈钢失效，更换烧结不锈钢；加在线过滤器，对样品进行过滤；死体积或柱外体积过大，将连接点降至zui低；尽可能使用内径较细的连接管；柱效下降，更换柱子；采用保护柱，对柱子进行再生。
9. 出现平头峰
检测器设置不正确；进样体积太大或样品浓度太高。
10. 出现鬼峰
进样阀残余峰，可能为上次样品的残余。在每次进完样后用充足的时间来平衡和清洗系统；样品中存在未知物，改进样品的预处理；流动相污染，更换新流动相，尽可能现配现用，隔夜的流动相再次使用时要过滤；尽可能使用hplc级试剂；流路中有小的气泡，打开purge阀，加大流速排除。
11. 峰分叉
①保护柱或分析柱污染：取下保护柱再进行分析,如果必要更换保护柱。如果分析柱阻塞,拆下来清洗。如果问题仍然存在,可能是柱子被强保留物质污染,运用适当的再生措施。如果问题仍然存在,入口可能被阻塞,更换筛板或更换色谱柱。②样品溶剂不溶于流动相改变样品溶剂,如果可能采取流动相作为样品溶剂。
12. 峰变形
样品过载，减少样品载量。
13. 早出的峰变形
样品溶剂选择不恰当 ①减少进样体积 ②运用低极性样品溶剂
14. 早出的峰拖尾程度大于晚出的峰
柱外效应 ①调整系统连接(使用更短、内径更小的管路) ②使用小体积的流通池
15. 酸性或碱性化合物的峰拖尾
缓冲不合适①使用浓度50～100 mm的缓冲液②使用pka等于流动相ph值的缓冲液
16. 额外的峰
(1)样品中有其他组分：正常现象；
(2)前一次进样的洗脱峰：①增加运行时间或梯度斜率②提高流速；
(3)空位或鬼峰：①检查流动相是否纯净 ②使用流动相作为样品溶剂 ③减少进样体积。
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