2015版中国药典-野菊花 HPLC分析
■《中国药典》 收载情况【来源】 本品为菊科植物野菊chrysanthemum indicum l.的干燥头状花序。秋、冬两季花初开放时采摘，晒干，或蒸后晒干。
【功能与主治】 清热解毒，泻火平肝。用于疔疮痈肿，目赤肿痛，头痛眩晕。
【含量测定】 蒙花苷照液相色谱法（通则0512)测定。
色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-水-冰醋酸（26:23:1）为流动相；检测波长为334 nm。理论板数按蒙花苷峰计算应不低于3000。
对照品溶液的制备：取蒙花苷对照品适量，精密称定，加甲醇（必要时加热）制成每1 ml含25μg的溶液，即得。
供试品溶液的制备：取本品粉末(过三号筛)约0.25 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇100 ml，称定重量，加热回流3小时，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。
测定法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各20 µl，注入液相色谱仪，测定，即得。
■野菊花药材液相色谱方法的建立【色谱行为描述】
《中国药典》中野菊花的含量测定以蒙花苷为质量评价依据，蒙花苷在inertsilods-3（4.6×250mm，5μm）中的色谱行为是：在流动相组成为甲醇-水-冰醋酸系统时，流动相的比例对蒙花苷及其相邻色谱峰的分离度有一定影响，流动相比例为甲醇：水：醋酸=52:46:2时，其分离效果与分析时间合适，选择甲醇的比例在48%~57%（v/v）之间均可获得较好的分析效果；柱温对蒙花苷的保留时间及其相邻色谱峰的分离度有微小影响，经考察建议温度为30℃；流动相中醋酸对蒙花苷的分离度及拖尾因子均无明显影响，但对分析时间有一定的改变，在醋酸浓度2%（ph=2.01）时较为合适。*流动相配比范围：甲醇：水：冰醋酸（48~57）：（41~51）：（1~5），柱温范围：25~35℃。综上所述，经考察在流动相甲醇-水-冰醋酸比例为52:48:2，柱温30℃的色谱条件下能得到较满意的分析效果。
野菊花在上述色谱条件下，采用shim-pack vp-ods色谱柱表现出和inertsil ods-3色谱柱相似的色谱行为，保留时间和柱效相当。
样品来源： 本品为菊科植物野菊chrysanthemum indicum l.的干燥头状花序。秋、冬两季花初开放时采摘，晒干，或蒸后晒干。
对照品： 蒙花苷（成都曼斯特生物科技有限公司，批号：must-15101207，含量：99.51%）
对照品溶液的制备： 取蒙花苷对照品适量，精密称定，加甲醇（必要时加热）制成每1 ml含25μg的溶液，即得。
供试品溶液的制备： 取本品粉末(过三号筛)约0.25 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇100 ml，称定重量，加热回流3小时，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。
*使用色谱条件： 仪器配置：
色谱柱： 5020-01732 inertsil ods-3 (4.6×250 mm，5μm ) lc-20ad 高压泵
流动相： 甲醇-水-冰醋酸（26:23:1） spd-10avp紫外可见光检测器
柱温： 30℃ dgu-20a3脱气机
检测波长： 334nm cto-10asvp柱温箱
流速： 1.0ml/min sil-10advp 自动进样器
进样量： 20μl
*此条件同样适用于shim-pack vp-ods(4.6×250 mm, 5 μm)，相关谱图见附注1。
■蒙花苷对照品溶液：
■供试品溶液：
■蒙花苷标准曲线：
■蒙花苷的重复性：序号对照品（10μl）样品（20μl）
t/min 峰面积 t/min 峰面积
113.041 1320558 12.924 1442579
213.083 1316741 12.950 1431804
313.020 1317305 13.013 1427972
平均值13.048 1318201 12.960 1434118
rsd/%0.24 0.16 0.35 0.53
附注1：shim-pack vp-ods (4.6×250mm，5μm )色谱柱用于野菊花分析■蒙花苷对照品溶液：
■供试品溶液：
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色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-水-冰醋酸（26:23:1）为流动相；检测波长为334 nm。理论板数按蒙花苷峰计算应不低于3000。
对照品溶液的制备：取蒙花苷对照品适量，精密称定，加甲醇（必要时加热）制成每1 ml含25μg的溶液，即得。
供试品溶液的制备：取本品粉末(过三号筛)约0.25 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇100 ml，称定重量，加热回流3小时，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。
测定法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各20 µl，注入液相色谱仪，测定，即得。
■野菊花药材液相色谱方法的建立【色谱行为描述】
《中国药典》中野菊花的含量测定以蒙花苷为质量评价依据，蒙花苷在inertsilods-3（4.6×250mm，5μm）中的色谱行为是：在流动相组成为甲醇-水-冰醋酸系统时，流动相的比例对蒙花苷及其相邻色谱峰的分离度有一定影响，流动相比例为甲醇：水：醋酸=52:46:2时，其分离效果与分析时间合适，选择甲醇的比例在48%~57%（v/v）之间均可获得较好的分析效果；柱温对蒙花苷的保留时间及其相邻色谱峰的分离度有微小影响，经考察建议温度为30℃；流动相中醋酸对蒙花苷的分离度及拖尾因子均无明显影响，但对分析时间有一定的改变，在醋酸浓度2%（ph=2.01）时较为合适。*流动相配比范围：甲醇：水：冰醋酸（48~57）：（41~51）：（1~5），柱温范围：25~35℃。综上所述，经考察在流动相甲醇-水-冰醋酸比例为52:48:2，柱温30℃的色谱条件下能得到较满意的分析效果。
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对照品： 蒙花苷（成都曼斯特生物科技有限公司，批号：must-15101207，含量：99.51%）
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*使用色谱条件： 仪器配置：
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■蒙花苷标准曲线：
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t/min 峰面积 t/min 峰面积
113.041 1320558 12.924 1442579
213.083 1316741 12.950 1431804
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