人结肠癌细胞（荧光素酶标记）（L15）细胞处理方法
人结肠癌细胞（荧光素酶标记）)（l15）
平台编号:zl-050647
规格:1×10⁶cells/t25培养瓶
细胞信息:sw620/luc+l15
产品信息
名称sw620/luc(人结肠癌细胞（荧光素酶标记）)（l15）（str鉴定正确）
种属人类
年龄（性别）男性，51岁
组织来源结直肠腺癌，来自转移淋巴结
生长特性贴壁细胞
细胞形态上皮细胞样
生物安全等级1
生长培养基leibovitz's l-15＋10%fbs＋1%p/s
推荐传代比例1:3-1:4
推荐换液频率2~3次/周
倍增时间~20-26小时
冻存条件
冻存液：55%基础培养基+40%fbs+5%dmso
温度：液氮
培养条件
气相：空气，100 %
温度：37℃
致瘤性yes,in nude mice(tumors developed within 21 days at 100 %frequency(5/5)in nude mice inoculated subcutaneously with 1×10^7 cells).
抗原表达情况blood type a;rh+
基因表达情况carcinoembryonic antigen(cea)0.15 ng/10^6 cells/10 days;transforming growth factor alpha;matrilysin.the cells are negative for expression of csap(csap-)and colon antigen 3,negative.the cells are positive for keratin by immunoperoxidase staining.the line is positive for expression of c-myc,k-ras,h-ras,n-ras,myb,sis and fos oncogenes.
注意事项1、该细胞推荐使用leibovitz's l-15培养基进行培养，leibovitz's l-15不可以通入二氧化碳，会产生细胞毒性；2、如您没有无二氧化碳的培养箱，可使用dmem替代leibovitz's l-15，使用dmem培养基时即可正常通入5%二氧化碳；3、配套专用培养基默认leibovitz's l-15配置，如需dmem配方，请联系销售下单备注更改。
保藏机构atcc;ccl-227 ecacc;87051203
细胞处理：
1）冻存细胞的复苏：
将含有1ml细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入到含4-6ml完quan培养基的离心管中混合均匀。在1000rpm条件下离心3-5min，弃去上清液，完quan培养基重悬细胞。然后将细胞悬液加入含6-8ml完quan培养基的培养瓶（或皿）中37℃培养过夜。第二天显微镜下观察细胞生长情况和细胞密度。
2）细胞传代：如果细胞密度达70%-90%，即可进行传代培养。
该细胞为悬浮和轻微的贴壁细胞，传代可以参考以下方法：
1.收集：将培养瓶中的悬浮的细胞收集到离心管中。用不含钙、镁离子的pbs润洗细胞1-2次。由于细胞贴壁不牢pbs润洗后细胞会脱落所以pbs也要回收到离心管中。
2.加入0.25％（w/v）胰蛋白mei-0.53 mm edta于培养瓶中（t25瓶1-2ml，t75瓶2-3ml）置于37℃培养箱中消化1-2分钟（难消化的细胞可以适当延长消化时间），然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加入3-4ml含10%fbs的培养基来终止消化。
3.将收集到的悬浮细胞、pbs清洗液中的细胞和消化下来的贴壁细胞以1000rpml离心5min，弃去上清，补加1-2ml培养液后重悬混匀后将细胞悬液按1：2的比例分到新t25瓶中，添加6-8ml按照说明书要求配置的新的完quan培养基以保持细胞的生长活力，后续传代根据实际情况按1:2~1:5的比例进行。
3）细胞冻存:收到细胞后建议在培养前3代时冻存一批细胞种子以备后续实验使用。
下面t25瓶为例；
1.细胞冻存时按照细胞传代的过程收集消化好的细胞到离心管中，可使用血球计数板计数，来决定细胞的冻存密度。一般细胞的推荐冻存密度为1×106~1×107个活细胞/ml.
2.1000rpm离心3-5min，去掉上清。用配制好的细胞冻存液重悬细胞，按每1ml冻存液含1×106~1×107个活细胞/ml分配到一个冻存管中将细胞分配到冻存管中，标注好名称、代数、日期等信息。
将要冻存的细胞置于程序降温盒中，-80度冰箱中过夜，之后转入液氮容器中储存。同时记录好冻存管在液氮容器中的位置以便后续查阅和使用。
智立中特（武汉）生物科技有限公司主要致力于质粒微生物资源的保护、共享和持续利用，围绕我国生命科学研究、生物技术创新和产业发展等重大需求，探索、发现、收集国内外的微生物资源，妥善长期保存管理；在保证生物安全和保护知识产权的前提下，为工农业生产、卫生健康、环境保护、科研教育提供质粒载体物物种资源、基因资源、信息资源和专业技术服务。旗下质粒载体网是一款提供质粒载体展示及定制的专业型网站，由智立中特（武汉）生物科技有限公司联合多家企业公司科研院校共同打造！主要展示了各种基因类型下的质粒载体！
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规格:1×10⁶cells/t25培养瓶
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种属人类
年龄（性别）男性，51岁
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生物安全等级1
生长培养基leibovitz's l-15＋10%fbs＋1%p/s
推荐传代比例1:3-1:4
推荐换液频率2~3次/周
倍增时间~20-26小时
冻存条件
冻存液：55%基础培养基+40%fbs+5%dmso
温度：液氮
培养条件
气相：空气，100 %
温度：37℃
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1）冻存细胞的复苏：
将含有1ml细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入到含4-6ml完quan培养基的离心管中混合均匀。在1000rpm条件下离心3-5min，弃去上清液，完quan培养基重悬细胞。然后将细胞悬液加入含6-8ml完quan培养基的培养瓶（或皿）中37℃培养过夜。第二天显微镜下观察细胞生长情况和细胞密度。
2）细胞传代：如果细胞密度达70%-90%，即可进行传代培养。
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