黑色素瘤相关抗原E2/肝细胞癌相关蛋白3​抗体分子标记技术

黑色素瘤相关抗原e2/肝细胞癌相关蛋白3抗体分子标记技术:
(一)原理
当应用化学氧化法时(nai)遇强氧化剂,离子被氧化为分子,所生成的自由分子可与某些基团进行卤化反应。蛋白质分子可进行卤化反应的基团主要为残基,残基也可能进行化。在应用胺t( chloramine t)法的实验中,所用的氧化剂(1,3,4,6- tetrachloro-3a,6adipheny l-glucoluril)强挥发性的有机溶剂中。该溶剂加入试管后,先让其挥发(即让氧化剂将试管包被),然后把na125i和蛋白质液加入包被好的试管中,反应完成即将混合液移入他管终止反应。
(二)准备
1.试剂
经亲和层析纯化的多克隆抗体或单克隆抗体;0.5mol/l磷酸钠缓冲液,ph7.5;无载体的na125i3.7gbq/ml(100mci/ml)的naoh液;100g/l三醋酸;70%乙醇;新鲜制备的含2mg/m1络胺t的0.5mol/l磷酸钠缓冲液(ph7.5);胺t反应终止缓冲液;
(三)操作要点
1.用胺t法进行化,也可在大约ph7.0的缓冲液中进行;
2.如果氧化反应损伤蛋白质,可将抗体与异硫酸荧光素(fitc)偶联)胺t量减少到0.02mg/m,并将偏重亚硫酸液的浓度降到0.024mg/ml;
3. iodogen-包被的试管可在干燥器中,于室温下保存多年;
4.1251标记的抗体,在制备后六周内均可使用(1251的半衰期为59.6天);
5.要注意保证所用的na1251是新鲜的,陈旧制剂的比活性低;
6.碘化偶尔会对抗原的抗体结合位点有干扰,因此降低其结合能力,但这种情况很少见。
phospho-ack1 (tyr859 + 860)磷酸化ack1抗体
phospho-ampk alpha-1(ser485+ser491)磷酸化腺苷单磷酸活化蛋白激酶α1抗体
phospho-ampk beta 1 (ser108)磷酸化腺苷单磷酸活化蛋白激酶β1抗体
phospho-alk (tyr1604)磷酸化间变型淋巴瘤激酶抗体
phospho-atm(ser1981)磷酸化毛细血管扩张性共济失调症突变蛋白抗体
phospho-atp citrate lyase (ser455)磷酸化三磷酸腺柠檬酸裂解酶抗体
phospho-atr (ser428)磷酸化atr抗体
amn1细胞核重定位及纺锤体检查点蛋白amn1抗体
asf1a细胞衰老相关蛋白asf1a抗体
agphd1氨基糖苷类磷酸结构域蛋白抗体
asgpr1唾液酸糖蛋白受体1抗体
arsf芳香基硫酸酯酶f抗体
akap5a激酶锚定蛋白5抗体
atxn3l小脑脊髓共济失调蛋白3抗体
aste1aste1蛋白抗体
phospho-apg4b(ser309)磷酸化自噬相关蛋白4b抗体
afap微丝相关蛋白1抗体
adora1腺苷a1a受体抗体
arsb芳基硫酸酯酶b抗体
abatγ氨基丁酸转氨酶抗体
a2bp1共济失调蛋白2结合蛋白1抗体
adam17肿瘤坏死因子α转换酶
arnt2芳香烃受体核转录蛋白2抗体
abh8alkb同源蛋白8抗体

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