为什么选择cas9蛋白而不是cas9 dna或mrna?
cas 9重组蛋白比核酸递送速度更快,一旦进入细胞内就完-全活跃,没有潜伏期(与核酸所需的转录和翻译机器相反)。
这些特性使核酸酶蛋白递送特别适用于精密基因组工程。
艾美捷oz biosciences优化的cas9核酸酶#cas9050化脓性链球菌设计用于活细胞或生物体的基因组编辑以及体外消化。
optimized cas9 nuclease s. pyogenes is designed for genome editing in living cells or organisms and also for in vitro digestion.
increased genome editing efficiency using cas9/rnp delivery
successful crispr/cas9 genome editing can be performed through diverse approaches (plasmids, mrna, nuclease, viral delivery)
sizes
cas9050: 50 优化的cas9核酸酶µg cas9 nuclease in 50 µl
cas9100: 100 µg cas9 nuclease in 100 µl
cas9500: 500 µg (5x100 µg) cas9 nuclease in 500µl (5x100 µl)
图1:用sgrna编程的cas9核酸酶。结合后,短向导rna(sgrna)特异性靶向短dna序列标签(pam)。cas9核酸酶在pam序列上游切割dna三个核苷酸。
高效的核酸递送是基因组编辑实验的关键步骤。为了获得优化的cas9核酸酶递送,建议亲交付crispr转染试剂。
推荐用于crispr cas9 基因组编辑实验。
优化的cas9核酸酶化脓性链球菌设计用于活细胞或生物体的基因组编辑以及体外消化。
使用pro-deliverin crispr在细胞中进行基因组编辑
cas9核酸酶可以直接递送到培养物或生物体中的活细胞中,使用prodeliverin crispr(# pic60100 或 #pic60500)。以下方案是在24孔板中进行基因组编辑的示例:
制备1 μg cas9 核酸酶和 250 ng sgrna 的混合物上下移液轻轻混合
在室温(推荐10°c)下孵育 25 分钟以形成 cas9/rnp 复合物直接加入 2 μl prodeliverin crispr
在室温(推荐20°c)下孵育 25 分钟以形成复合物用完整的培养基补充 50 μl
将复合物滴加到细胞上,并在标准培养条件下孵育。
使用cas9/rnp 递送提高基因组编辑效率 成功的 crispr/cas9 基因组编辑可以通过多种方法(质粒、mrna、核酸酶、病毒递送)进行。
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