怎么挑选适合且质量又牢靠的ELISA试剂盒呢?

酶联免疫吸附试验技能从1970年代展开至今已近半个世纪,是一项试验室zui基本的免疫检测技能,被广泛的应用于基础研究和检验。那么面临市面上数以千计的试剂盒,数百家供货商,关于刚进入试验室的新手或许准备展开elisa试验的人员, 又该怎么挑选适合且质量又牢靠的elisa试剂盒呢?
1. 首要选定elisa类型
elisa技能可用于测定抗原,也可用于测定抗体。
elisa办法中有三个必要的试剂:
(1) 固相的抗原或抗体,即免疫吸附剂(immunosorbent);
(2) 酶符号的抗原或抗体,称为结合物(conjugate);
(3) 酶反响的底物。
一般可将elisa分为以下几种类型,试验君首要需求依据自己的待检物来确认试剂盒类型。
a、双抗体夹心法:针对抗原分子上两个不同抗原决定簇的单克隆抗体分别作为固相捕获抗体和酶标检测抗体。适用于测定二价或二价以上的大分子抗原如血浆中的细胞因子,不适用于测定半抗原及小分子单价抗原。同理,也有双抗原夹心法测抗体。
b、直接法:将抗原直接固定在固相载体上,参加酶符号的一抗,即可测定抗原总量。此法操作手续简略,因无须运用二抗可防止交互反响。
c、间接法:间接法是检测抗体常用的办法,其原理为利用酶符号的抗抗体(抗*抗体来检测与固相抗原结合的待检抗体。
d、竞争法:小分子抗原或半抗原因缺少可作夹心法的两个以上的位点,因而不能用双抗体夹心法进行测定,可以采用竞争法形式。当抗原材猜中的搅扰物质不易除掉,或不易得到足够的纯化抗原时,可用此法检测特异性抗体。
2. 依据试验物种及待检样品性质来挑选elisa
假如试验君的试验样品为人、小鼠或大鼠样品,那么要挑选一个合适的试剂盒相对容易,但假如您的试验样品来源于其他物种如鸡、牛、猴等,则市面上能供给的试剂盒种类却很少。且不可轻信能供给近万种试剂盒,掩盖多物种的供货商。但假如又非要检测这些物种的目标时,要对待检物(如有种属差异性)进行同源性剖析以及试剂盒的种属交叉反响数据。关于样品类型而言,一般的商业化试剂盒都通过血清、血浆和细胞培养上清液的验证。在挑选试剂盒时,要详细阅读说明书,比方血浆样本抗凝剂的运用是否与试剂盒兼容。
3. 依据样品中检测物水平来挑选试剂盒
假如试验君关于样品中待检物的水平没有任何可参阅的数据,挑选宽动力学检测规模的试剂盒。假如样品中待检物的含量很低,主张挑选高灵敏度的试剂盒。为了降低基质效应,有必要用稀释液至少做2倍稀释。假如样品中待检物含量远超过试剂盒的检测规模(标曲规模),也需做恰当的倍数稀释。在zui后计算结果时,需乘以相应的稀释倍数。
4. 依据样本可获得性来挑选试剂盒
一般而言,商业化试剂盒的样品用量都在50ul或100ul, 但也有一些供货商的试剂盒对样品的用量要求可少至10ul。假如您的样品很宝贵或较难获取,则需求认真考虑试剂盒对样品用量的要求。假如样品量少,且要做多因子检测时更需慎重。
5. 详尽比较试剂盒要害性技能参数
elisa试剂盒的要害技能参数包括板内差异性、板间差异性、批间差异性、重复性、特异性及交叉反响性、回收率等。假如试验君经常展开elisa试验,主张运用同一厂家的试剂盒,这样可尽量确保数据的重复性(当然条件是试验条件的一致性)。关于科研用的定量elisa试剂盒,不同的生产厂家运用的抗体对、酶以及底物、生产工艺和研制实力不尽相同,自然不同厂家试剂盒测出的数据会有差异。

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