离子色谱法测定*注射液 的含量
*注射液（pamidronate disodium injection）为* 加适量*制成的灭菌水溶液。*是一种双膦酸类骨吸收抑制 剂，临床上广泛应用于治疗骨质疏松症、肿瘤并发的高钙血症和变形性骨炎 [1]。目前液相色谱法测定*及其制剂的方法主要有荧光检测高 效液相色谱法[2, 3]、蒸发光散射液相色谱法[4]和示差折光检测液相色 谱法[5]。由于荧光检测需要柱前衍生，步骤繁琐；蒸发光检测需要用到离子对 试剂，对实验条件要求较高，重现性较差；示差折光检测的灵敏度较低等原 因，故本文采用离子色谱法建立了*注射液的含量检测方法。
帕米膦酸含有一个氨基和两个膦酸基团，为双性离子，通过一定ph 抑制其中一方向电离，可以通过离子色谱进行分离。而中性情况下其带负 电荷较多，可以通过电导检测器进行检测。如果使用阴离子交换离子色谱 分离，由于双膦酸基团价态较高，疏水性较强，所以适宜使用疏水性弱的 柱子来进行分离。曾实验过疏水性极弱的dionex ionpac as16，疏水性低 的dionex ionpac as19，及疏水性中低的dionex ionpac as11－hc进行实 验，用oh梯度进行淋洗，但均出现峰分叉明显，峰扩展宽等情况，可能受 其氨基的影响。而使用碳酸盐作为淋洗液的分离柱，如亲水性强的dionex ionpac as22，则由于保留太强无法出峰。如使用酸作为淋洗液，则可抑制 其电离，使其保持较低的价态，从而加快出峰。但由于酸只能用非抑制型电 导检测，因此使用非*电离的有机酸比*电离的无机酸有助于降低背景 值。且多价态的酸其电离类似于膦酸，更有利于洗脱，故选用草酸，邻苯二 甲酸等进行试验。邻苯二甲酸pka1=2.95 pka2=5.41，草酸的pka1=1.23, pka2=4.19，因此相同摩尔浓度的淋洗液，草酸由于电离更强，抑制双膦酸 电离效果更明显，帕米膦酸出峰更早。且在草酸淋洗液中，帕米膦酸响应更 强，相同浓度的峰高为其在邻苯二甲酸淋洗体系中的20倍。因此使用草酸进 行后续实验。
测试条件
仪器：赛默飞ics系列离子色谱。 分析柱：ionpac as22+ionpac ag22，4 mm 流动相组成：草酸3 mm 流速：1.2 ml/min 柱温：30 ℃
检测方式：直接电导检测
进样量：25 µl样
样品前处理
注射液按测试条件下的规定稀释后直接进样。
结果与讨论
1. 方法专属性考察
取对照品储备液，加水制成浓度约为0.45 mg/ml 的对照品溶液，与供试品溶液、空白辅料溶液和水在 上述色谱条件下分别进样，*的保留时间为 7.07 min，理论板数按*计为5010，分离效果 好，空白辅料溶液无干扰，见图1。
考察了色谱柱温度分别为30 ℃、35 ℃和40 ℃时的色 谱行为，当温度逐渐升高时，保留时间逐渐增大，帕米 膦酸二钠峰的理论板数逐渐减小，故柱温为30 ℃。
3. 草酸溶液浓度的影响
考察了草酸溶液浓度（2 mmol/l~10 mmol/l）的影 响（如图2所示），当草酸溶液浓度逐渐增大时，帕米膦 酸二钠保留时间减小，*主峰与水溶液的负 峰逐渐接近，为了保证分离效果和节省分析时间，确定 草酸溶液浓度为3 mmol/l。
4. 线性与检出限
精密量取对照品储备液5、5、3、5、5、2、2 ml分 别置20、25、20、50、100、50、100 ml量瓶中，加 水稀释至刻度，在上述色谱条件下进样分析，以溶液浓 度（mg/ml）为横坐标y，峰面积（ µs*min）为纵坐标 x，进行线性回归，回归方程为：y=31.559x-0.1407， 相关系数为r＝0.9996，表明*在浓度 0.07～0.92 mg/ml范围内线性关系良好。
取对照品储备液逐级稀释并注入离子色谱仪，其检 测限和定量限分别为0.2 µg/ml和0.7 µg/ml。
5. 仪器精密度试验
取供试品溶液连续进样6次，测定峰面积，其rsd 为0.2％，结果表明，精密度良好。
6. 稳定性试验
取供试品溶液于配制后0，1.5，3，4，5，6小时分 别进样，其峰面积的rsd为0.2％，表明供试品溶液在6 小时内是稳定的。
7. 含量测定的回收率试验
按*注射液处方，分别取帕米膦酸二 钠对照品与辅料适量，精密称定，配成相当于标示量 80％、100％和120％ 3个浓度的溶液，每个浓度3份，照 上述色谱条件进行测定。其低、中、高3种浓度加入量的 回收率（n=3）分别为99.6％（rsd=0.2%），100.0％ （rsd=0.3%），100.1％（rsd=0.5%），平均回收率 为99.9％（n=9）。
8. 实际样品的分析
取本品3批，按“1.4.2”项下制备供试品溶液，进样 测定，其结果见表1。
结论
本文所建立的赛默飞ics系列离子色谱测定*注射液 的含量的方法，准确、灵敏、简便，可用于帕米膦酸二 钠注射液的质量控制，并为*其他制剂的含 量测定提供了参考。
[参考文献]
[1] 钟永祥, 张祥斌. *的临床应用进展 [j]. 中华全科医师杂志, 2005, 4 (1): 27-29. [2] 刘爱芹, 马淑涛. 液相色谱法测定注射用帕 米膦酸二钠的含量[j]. 中国药业, 2007, 16 (21): 12-13. [3] 孔俐文, 胡志远, 王东凯, 黎玲, 宋扬, 苏娟娟. 反 相液相色谱法测定*的含量[j]. 中国药房, 2007, 18 (1): 60-61. [4] 谢赞, 蒋晔, 田书霞. 反相离子对色谱-蒸发光散 射法测定*及其有关物质[j]. 药物分 析杂志, 2006, 26 (12): 1729-1732. [5] usp-nf[s].30. 2007: 2848.
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测试条件
仪器：赛默飞ics系列离子色谱。 分析柱：ionpac as22+ionpac ag22，4 mm 流动相组成：草酸3 mm 流速：1.2 ml/min 柱温：30 ℃
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结果与讨论
1. 方法专属性考察
取对照品储备液，加水制成浓度约为0.45 mg/ml 的对照品溶液，与供试品溶液、空白辅料溶液和水在 上述色谱条件下分别进样，*的保留时间为 7.07 min，理论板数按*计为5010，分离效果 好，空白辅料溶液无干扰，见图1。
考察了色谱柱温度分别为30 ℃、35 ℃和40 ℃时的色 谱行为，当温度逐渐升高时，保留时间逐渐增大，帕米 膦酸二钠峰的理论板数逐渐减小，故柱温为30 ℃。
3. 草酸溶液浓度的影响
考察了草酸溶液浓度（2 mmol/l~10 mmol/l）的影 响（如图2所示），当草酸溶液浓度逐渐增大时，帕米膦 酸二钠保留时间减小，*主峰与水溶液的负 峰逐渐接近，为了保证分离效果和节省分析时间，确定 草酸溶液浓度为3 mmol/l。
4. 线性与检出限
精密量取对照品储备液5、5、3、5、5、2、2 ml分 别置20、25、20、50、100、50、100 ml量瓶中，加 水稀释至刻度，在上述色谱条件下进样分析，以溶液浓 度（mg/ml）为横坐标y，峰面积（ µs*min）为纵坐标 x，进行线性回归，回归方程为：y=31.559x-0.1407， 相关系数为r＝0.9996，表明*在浓度 0.07～0.92 mg/ml范围内线性关系良好。
取对照品储备液逐级稀释并注入离子色谱仪，其检 测限和定量限分别为0.2 µg/ml和0.7 µg/ml。
5. 仪器精密度试验
取供试品溶液连续进样6次，测定峰面积，其rsd 为0.2％，结果表明，精密度良好。
6. 稳定性试验
取供试品溶液于配制后0，1.5，3，4，5，6小时分 别进样，其峰面积的rsd为0.2％，表明供试品溶液在6 小时内是稳定的。
7. 含量测定的回收率试验
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[参考文献]
[1] 钟永祥, 张祥斌. *的临床应用进展 [j]. 中华全科医师杂志, 2005, 4 (1): 27-29. [2] 刘爱芹, 马淑涛. 液相色谱法测定注射用帕 米膦酸二钠的含量[j]. 中国药业, 2007, 16 (21): 12-13. [3] 孔俐文, 胡志远, 王东凯, 黎玲, 宋扬, 苏娟娟. 反 相液相色谱法测定*的含量[j]. 中国药房, 2007, 18 (1): 60-61. [4] 谢赞, 蒋晔, 田书霞. 反相离子对色谱-蒸发光散 射法测定*及其有关物质[j]. 药物分 析杂志, 2006, 26 (12): 1729-1732. [5] usp-nf[s].30. 2007: 2848.
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