ELISA试剂盒选对、用对,才能事半功倍!

elisa试剂盒以灵敏度较高、特异性较好的特点在上得到了广泛的应用,但操作中的各个环节对试验的检测效果影响较大,如不注意,有可能导致显色不全、花板等结果。我将操作中各个环节常出现问题的原因及解决办法总结于下,以期给同行带来一些启发,提高试验质量。下面分析elisa试验操作中可能影响结果的原因,并给出相应的解决办法。
一、选择试剂
选择质量优良的检测试剂,严格按照试剂说明书进行操作,操作前将试剂在室温下平衡30-60分钟。
二、加样
可能原因:
1)血清或血浆标本分离不好即进行加样;
2)手工操作中,加样板过多造成加样后放入孵箱前等待时间过长(特别是室内温度较高时);
3)加完标本再加酶试剂时酶溅出孔外。
解决办法:
1) 标本为血清:将血液先自然存放1-2小时后,再用3000rmp离心15分钟;标本为血浆:必须使用含抗凝剂的血液标本收集管,采血后必须立即颠倒*混合5-10次,放置一段时间后,3000rpm离心15分钟;若在几天内检测,可放在2-8℃冰箱中,若要贮存,则置于-20℃的低温冰箱内。
2) 加样后及时放入孵箱。
3) 加酶试剂后用吸水纸在酶标板表面轻拭吸干。
4) 如果采用at或其他全自动加样,选择fame或其他后处理仪器加酶试剂。
5) 标本较多时,请分批操作。
三、孵育
可能原因:
1) 孵育时未贴封片或加盖,使标本或稀释液蒸发,吸附于孔壁,难于清洗*;
2) 孵育时间人为延长,导致非特异性结合紧附于反应孔周围,难以清洗*。
解决办法:
1) 贴封片或加盖;
2) 按说明步骤严格控制操作时间。
四、洗板
elisa试剂盒可能原因:
1) 采用手工洗板,孔与孔之间液体交叉。
2) 采用半自动洗板机洗板时,洗液量不足,导致洗板不*;洗板针堵塞,抽吸不*;洗板不畅,导致洗板效果差。
3) 反应板过多造成洗板等待时间长。
解决办法:
1) 保证洗液注满各孔,洗板针畅通,洗完板后在吸水纸(选择干净、无或少尘的吸水材料)上轻轻拍干;
2) 合理安排,或多用几台洗板机。
五、显色
可能原因:
1) 显色剂配制后放置时间过长或使用过期显色剂;
2) 加显色剂时溅出孔外造成液体回流。
解决办法:
1) 显色剂尽量在临用前配制,坚持不用过期显色剂,肉眼可见浅蓝色的tmb显色剂不用;
2) 加样时保持显色剂不外流;
3) a、b液应避免接触金属器械。
六、终止
可能原因如加终止液时产生较多气泡,导致假阳性增加。所以在加终止液时应避免产生气泡。
七、读板
如读板时板底不清洁等。应保证酶标板清洁。所以在整个操作过程中保证酶标板不接触次氯酸; 尽可能实现elisa检测标准自动化,有效提高检测质量。
elisa试剂盒在实际操作中,除了选择优良试剂外,必须严格按照操作步骤进行操作,同时作好室内质控、室间质评,以严谨的工作作风检测每一份标本,才能保证检测质量。现在国内已有相当数量的单位拥有全自动酶标仪,这对于实现elisa标准化检测、提高检测质量起到了重要作用。

知多D 油烟净化设备6个常用问题
生活污水处理设备可以有效处理生活污水
高分子防水材料拉伸试验方法(防水材料拉力机)
高温烧结箱式电炉怎么工作的
振动试验台与电磁式振动试验台介绍
ELISA试剂盒选对、用对,才能事半功倍!
6SL3040-0PA00-0AA1西门子控制单元适配器
超高清视频产业发展火热,5G提供有力支撑
在选择线束测试仪上看完这些或许对你有所帮助
数控机床系统数据的保护与备份恢复
称重传感器好坏的判断方法,看完秒懂!
奥地利rsf角度编码器MSS 15型技术数据
UT 6-TMC M 2A - 热磁设备断路器 0916605 技术资料
什么是半导体真空涂胶烘箱
毛细管液体粘滞系数测试实验仪究在垂直毛细管内的流动规律
弹性体挤出机参数
华瑞PGM-1820扩散式LEL可燃气体检测仪
深低温冻干机(超低温冷冻干燥机)设备概述
酒水灌装设备故障的故障排除及保养方法
分体式蒸汽流量表怎么避免干扰信号对仪表的测