土壤脲酶(s-ue)活性检测试剂盒说明书
微量法
注意:正式测定之前选择预期差异大的样本做预测定。
规格:100t/48s
产品内容:
试剂一: 甲苯2ml×1 瓶,4℃保存; (自备)
试剂二:粉剂×1 瓶,临用前加入9ml蒸馏水,充分溶解待用,4℃保存;用不完的试剂4℃保存;
试剂三:液体19ml×1 瓶,4℃保存;
试剂四a液:液体0.4ml×1 支,4℃保存;
试剂四b液:液体1.6ml×1 瓶,4℃保存;临用前将a液倒入b液中混合,待用;用不完的试剂4℃保存一周;
试剂五:液体 2ml×1 瓶,4℃保存;
标准品:液体 1ml×1 支,1mg/ml氮标准液。
产品说明:
s-ue能够水解尿素,产生氨和碳酸。土壤脲酶活性与土壤的微生物数量、有机物质含量、
全氮和速效氮含量呈正相关。土壤脲酶活性反应了土壤的氮素状况。利用靛酚蓝比色法测定脲酶水解尿素产生的nh3-n。
需自备的仪器和用品:
可见分光光度计/酶标仪、水浴锅、可调式移液器、微量玻璃比色皿/96 孔板、研钵、冰、甲苯(不允许快递) 和蒸馏水。
操作步骤:
a.培养
测定管
对照管
风干土样(g)
0.05
0.05
试剂一 (μl)
20
20
振荡混匀,使土样全部湿润,室温放置 15min
试剂二 (μl)
90
蒸馏水 (μl)
90
试剂三 (μl)
190
190
混匀,放入 37℃水浴培养 24h后, 10000g常温离心 10min,取上清液。
b.将培养结束的上清液稀释10 倍 (取0. 1ml上清液,加入0.9ml蒸馏水) 。若最终计算得到的δa仍大于0.5继续稀释。
c.标准品的准备:吸取适量的标准溶液,稀释至10 、8 、6 、4 、2 、1 、0.5 、0μg/ml。
d.测氨量 (在微量玻璃比色皿或96 孔板中加入下列试剂)
测定管
对照管
标准管
稀释后的上清液 (μl) /标准品
80
80
80
试剂四 (μl)
15
15
15
试剂五 (μl)
15
15
15
充分混匀,室温放置 20min
蒸馏水 (μl)
90
90
90
混匀,于630nm处,蒸馏水调零,读吸光值 a,计算δa=a测定管-a对照管。每个测定管设一个对照管。标准曲线的建立:根据标准管的浓度 (y) 和吸光度 ( x,减去浓度为 0 的空白管) ,做标准曲线。
脲酶活力计算
根据标准曲线,将δa带入公式 (x) 计算测定中样品的浓度 (μg/ml) y值。单位的定义:每天每g土样中产生1μgnh3-n定义为一个酶活力单位。
脲酶活力 (u/g土样) =y×10×v反总÷w÷t=60×y
10:稀释倍数;t:反应时间,1d;v反总:反应体系总体积,0.3ml;w:样本质量,0.05g。
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