生物样品处理方式方法

生物样品处理方式方法
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破碎是进行隔离或定性rna、dna、蛋白质和分析物的初期步骤。化学性和机械性(物理性)破碎法都可使用,但较多样品类型倾向使用化学性方法(例如:大肠杆菌及培养细胞)。然而,许多微生物、未受破坏之组织、固体标本如种子、或大型样品则不适用于化学性方法。针对这类有弹性的样品,便会使用根据磨碎、剪切、敲打和振荡为基础的机械/物理性方法。机械/物理性破碎方法有机械式均质机、手动均质、研磨、超声波破碎、混合碾磨机、涡旋机皆为常见的工具。这些样品处理的方法虽然每日广泛的使用,但未必被明确的了解。如同其它实验室内广泛使用的方法,这些方法经过研究人员的传承,很少去解释过程本身的意思。破碎和均质对实验的影响可能很小,但同时,所选择的工具与方法对实验结果亦可能有很大的影响。
可能的话,化学方法可能是优选的方法,例如:使用sds裂解e. coli,得到分离的质体,但此方法亦可能导致裂解液中有不需要的分子。化学方法对分离核酸是有效的,但使用去除剂和离液剂(detergents and chaotropes)使蛋白质变性(denature)。相同的问题也发生在蛋白质纯化时,加入裂解酵素后,之后必须移除裂解酵素。若加入化学物质是不切实际且无法有效运作的话,则另一个方法便是使用机械式和物理式的破碎。
机械/物理方式的破碎样品包含研磨、剪切、敲打和震动。有时候,很难分辨不同力量的差别。为了简单起见,我们以使用的工具来分类。如超声波破碎仪、高压破碎仪、组织研磨机、组织搅拌机、机械式均质机、涡旋震荡器等。在这些工具和方法中,超声破破碎和高压破碎是目前比较*方法,使用超声破碎和高压破碎进行样品处理既避免了化学方**掺入不必要分子的不足,同时又能达到理想的破碎效果。事实上,美国branson的超声波破碎仪在生物细胞破碎样品处理领域得到了广泛的应用,受到很多专家学者的好评。
理想的破碎**是使用一个或多个方法来达到需要的结果。实际上分离亚细胞碎片可能**步是使用剪刀切掉组织、接着使用手持式均质机研磨,*后使用超声波破碎仪分离。若任何一个步骤省略,将得到较低的结果。

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