超微量 Ca +2Mg +2—ATP 酶测试盒的测定意义
超微量 ca +2mg +2—atp 酶测试盒的测定意义
(测红细胞)
一、测定意义：
atp酶存在于组织细胞及细胞器的膜上，是生物膜
上的一种蛋白酶，它在物质运送、能量转换以及信息传
递方面具有重要的作用，机体在缺氧及一些疾病状态下，
此酶活力发生一系列改变。
二、测定原理：
atp酶可分解atp生成adp及无机磷，测定无机磷的
量可判断atp酶活力的高低。
三、试剂组成与配制：（试剂盒有效期6个月）
四、红细胞的前处理：
1、红细胞计数（见附录）或血红蛋白测定（试剂本所有售）。
2、红细胞溶血液的制备：
a、压积红细胞溶血液的制备：取肝素抗凝全血，1000
转/分，离心10分钟，弃上层血清，留下层压积红
细胞，取一定量的压积红细胞，加49倍的双蒸水，
例如取5μl的压积红细胞加入245μl双蒸水中，混
匀，使其充分溶血，对光观察直至溶液透亮。如果
预试结果太高，再将溶血液稀释成不同浓度再进行
预试后，再决定取样浓度。
b、全血红细胞溶血液的制备：取小鼠全血，轻轻摇匀，
取一定量的全血按照1：
24的体积比加24倍双蒸水，
制成25倍稀释的溶血液，例如取5μl的全血加双蒸
水120μl充分混匀，制成25倍稀释的溶血液。对光
观察直至溶液透亮。如果预试结果太高，再将溶血
液稀释成不同浓度再进行预试后，再决定取样浓度。
[注1]：制备好的溶血液尽快进行检测，否则易失活，
因而必须在所有的准备工作做好以后再配制
溶血液。
[注2]：用不完的抗凝全血4℃可保存2～3天，-20℃
以下保存一周或者更长时间。
[注3]：不可用磷酸盐缓冲液或含磷的试剂稀释样本。
[注4]：预试结果将绝对吸光度值（测定管吸光度值—
对照管吸光度值）控制在0.2左右为宜。
附录ⅰ：红细胞计数法
红细胞计数有以下三种方法，只需取其中一种即可以。
1、计数板直接红细胞计数：
①、红细胞稀释液的配制：柠檬酸三钠3.8克，甲醛
1ml，双蒸水100ml，混匀，4℃保存。
②、取1支试管，加入红细胞稀释液2ml，取抗凝全
血10µl加入试管稀释液中，反复吹吸数次，
再将试管颠倒数次混匀。
③、取一滴稀释血液灌入计数板。（应一次灌满，而且
不要灌得太多。）
④、用高倍镜计数左上、左下、右上、右下，中央5
个中方格的红细胞数，将数得的数字×1010，
即为每升血中的红细胞数。
2、光电比浊法计红细胞数：
取试管1支，加入上述红细胞稀释液4ml，再
取20µl抗凝全血，加入4ml稀释液中，反复吹吸数
次，再将试管颠倒数次混匀，立即倒入比色杯中，
于540nm，1cm光径，双蒸水调零进行比色，记下
吸光度值。以计数板计数的红细胞的数值为横坐标，
以相应管的吸光度值为纵坐标，作标准曲线。您可
以不做曲线，用附录ⅱ参考标准曲线图二（鼠红细
胞数与比浊法吸光度换算曲线）。根据标准曲线查出
红细胞数。
3、用血红蛋白（hb）来换算红细胞数：
取10µl抗凝全血加入2.5ml血红蛋白测试液
（本所有供应）中，混匀，静置10分钟，于540nm，
1cm光径，双蒸水调零进行比色。将测得的吸光度
乘以367.7即为血红蛋白的值。以计数板计数的红细
胞的数值为横坐标，以相应管的血红蛋白数为纵坐
标，作标准曲线。您可以不做曲线，用附录ⅱ的参
考标准曲线图一（鼠红细胞数与血红蛋白数的换算
曲线）。根据标准曲线查出红细胞数。
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量可判断atp酶活力的高低。
三、试剂组成与配制：（试剂盒有效期6个月）
四、红细胞的前处理：
1、红细胞计数（见附录）或血红蛋白测定（试剂本所有售）。
2、红细胞溶血液的制备：
a、压积红细胞溶血液的制备：取肝素抗凝全血，1000
转/分，离心10分钟，弃上层血清，留下层压积红
细胞，取一定量的压积红细胞，加49倍的双蒸水，
例如取5μl的压积红细胞加入245μl双蒸水中，混
匀，使其充分溶血，对光观察直至溶液透亮。如果
预试结果太高，再将溶血液稀释成不同浓度再进行
预试后，再决定取样浓度。
b、全血红细胞溶血液的制备：取小鼠全血，轻轻摇匀，
取一定量的全血按照1：
24的体积比加24倍双蒸水，
制成25倍稀释的溶血液，例如取5μl的全血加双蒸
水120μl充分混匀，制成25倍稀释的溶血液。对光
观察直至溶液透亮。如果预试结果太高，再将溶血
液稀释成不同浓度再进行预试后，再决定取样浓度。
[注1]：制备好的溶血液尽快进行检测，否则易失活，
因而必须在所有的准备工作做好以后再配制
溶血液。
[注2]：用不完的抗凝全血4℃可保存2～3天，-20℃
以下保存一周或者更长时间。
[注3]：不可用磷酸盐缓冲液或含磷的试剂稀释样本。
[注4]：预试结果将绝对吸光度值（测定管吸光度值—
对照管吸光度值）控制在0.2左右为宜。
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1、计数板直接红细胞计数：
①、红细胞稀释液的配制：柠檬酸三钠3.8克，甲醛
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②、取1支试管，加入红细胞稀释液2ml，取抗凝全
血10µl加入试管稀释液中，反复吹吸数次，
再将试管颠倒数次混匀。
③、取一滴稀释血液灌入计数板。（应一次灌满，而且
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④、用高倍镜计数左上、左下、右上、右下，中央5
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即为每升血中的红细胞数。
2、光电比浊法计红细胞数：
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取20µl抗凝全血，加入4ml稀释液中，反复吹吸数
次，再将试管颠倒数次混匀，立即倒入比色杯中，
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以相应管的吸光度值为纵坐标，作标准曲线。您可
以不做曲线，用附录ⅱ参考标准曲线图二（鼠红细
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3、用血红蛋白（hb）来换算红细胞数：
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标，作标准曲线。您可以不做曲线，用附录ⅱ的参
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