人成骨组织提取物冷冻保存细胞之方法
人成骨组织提取物冷冻保存细胞之方法:
冷冻保存方法一: 冷冻管置于4℃ 30~60 分钟→ （-20 ℃30 分钟*） → -80 ℃16~18 小时（或隔夜） → 液氮槽vaporphase 长期储存。
冷冻保存方法二: 冷冻管置于已设定程序之可程序降温机中每分钟降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下， 再放入液氮槽vapor phase长期储存。*-20 ℃不可超过1 小时， 以防止冰晶过大，造成细胞大量死亡，亦可跳过此步骤直接放入-80℃ 冰箱中，惟存活率稍微降低一些。
骨组织是一种坚硬的结缔组织，是由细胞、纤维和基质构成的。公司科技提供来自新鲜或冷冻人体成骨组织中高质量的总rna，pcr准备的条cdna链，蛋白质及其亚组分。这些临床定义的正常人体组织标本采集自各地方医院，采集工作根据irb和hipaa批准的方案进行。所有的产品在发货之前均经过严格的qa/qc流程以确保其质量。这些产品可以直接用于基因克隆，表达图谱分析以及各种分子生物学实验的研究。
总rna制备：利用qiagen rneasy kit的trizol试剂分离rna，然后用qiagen rna clean kit进行纯化。公司提供的总rna样品附有rna样品总浓度、总含量、电泳照片、od值测定结果等。
cdna制备：纯化后的总rna来合成cdna链，以50ul总反应体系进行逆转录，体系中包括mmlv反转录酶和随机引物以及10mg总rna。68℃反应10min 后终止rt反应。利用1x rt buffer 运输cdna，1 ul cdna 足够做一次pcr反应。所有cdna产品在订单发货之前都经过了严格的qa/qc分析，保证了产品的质量。
蛋白制备：利用改良型ripa buffer (50mmtris, ph7.2, 150mm nacl, 1mm edta, 1mm egta, 1% np-40 , 1mm na3vo4, 5mm naf, 400um pmsf, 1ug/ml of pepstatin a, 5ug/ml of aprotinin, 5ug/ml of leupeptin)制备人成骨组织裂解液，离心去除组织碎片，通过bio-rad蛋白检测试剂盒测定蛋白浓度，组织蛋白稀释后用非还原蛋白buffer (50 mm tris-hcl, ph 6.8, 5% glycerol, 1% sds, 0.002% bromphenol blue)添加5%β-巯基乙醇及pmsf，-80度保存。
潜在的应用： <1>已知基因的pcr克隆；<2>mrna选择性剪接；<3>基因克隆与目标测序；<4> western and northern blot；<5>蛋白检测与蛋白质组学；<6>芯片研究与表达图谱。
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骨组织是一种坚硬的结缔组织，是由细胞、纤维和基质构成的。公司科技提供来自新鲜或冷冻人体成骨组织中高质量的总rna，pcr准备的条cdna链，蛋白质及其亚组分。这些临床定义的正常人体组织标本采集自各地方医院，采集工作根据irb和hipaa批准的方案进行。所有的产品在发货之前均经过严格的qa/qc流程以确保其质量。这些产品可以直接用于基因克隆，表达图谱分析以及各种分子生物学实验的研究。
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cdna制备：纯化后的总rna来合成cdna链，以50ul总反应体系进行逆转录，体系中包括mmlv反转录酶和随机引物以及10mg总rna。68℃反应10min 后终止rt反应。利用1x rt buffer 运输cdna，1 ul cdna 足够做一次pcr反应。所有cdna产品在订单发货之前都经过了严格的qa/qc分析，保证了产品的质量。
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潜在的应用： <1>已知基因的pcr克隆；<2>mrna选择性剪接；<3>基因克隆与目标测序；<4> western and northern blot；<5>蛋白检测与蛋白质组学；<6>芯片研究与表达图谱。
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